肝脏HE染色实验

一、基本原理与实验目的

HE染色（苏mu精-伊红染色）是组织学和病理学中最基础的染色技术。其原理基于细胞组分对不同染料的亲和性差异：苏mu精（碱性染料）与细胞核内的DNA酸性成分结合，使核呈现蓝紫色；伊红（酸性染料）与细胞质中的碱性蛋白结合，使胞质呈粉红色。

在肝脏研究中，HE染色主要用于：

1. 观察肝细胞形态：包括细胞膜完整性、核质比、核仁清晰度等，评估药物或疾病引起的肝损伤。
2. 分析肝小叶结构：正常肝小叶呈多边形，肝细胞排列有序；异常时可见结构破坏、纤维增生或炎症浸润。
3. 诊断病理变化：如脂肪变性（胞质内空泡）、坏死（核碎裂）、纤维化（胶原沉积）等，辅助诊断肝炎、肝硬化及肝癌。

二、实验材料与试剂清单

三、具体操作步骤

1. 组织固定与处理

   • 固定：取肝脏组织后立即浸入4%多ju甲醛中，室温固定24小时，防止自溶。
   • 脱水与透明：梯度乙醇（70%→100%）逐级脱水各2-5分钟，二甲苯透明处理（3次，每次5分钟）。

2. 石蜡包埋与切片

   • 浸蜡：60℃石蜡中浸渍2小时，包埋成块。
   • 切片：切片厚度4 μm，烤片（60℃, 30分钟）增强附着力。

3. 染色流程

   • 脱蜡：二甲苯Ⅰ→Ⅱ→Ⅲ（各5分钟），梯度乙醇（100%→70%）复水。
   • 苏mu精染色：5-10分钟，流水冲洗；1%盐酸乙醇分化30秒，去除非特异性结合。
   • 返蓝：0.5%an水浸泡数秒，流水冲洗5分钟恢复核蓝色。
   • 伊红复染：1-3分钟，梯度乙醇脱水（70%→100%），二甲苯透明。
   • 封片：中性树胶封固，避免气泡。

四、结果观察与分析

1. 正常肝脏特征

   • 肝小叶：低倍镜下呈多边形，中央静脉居中，肝索放射状排列。
   • 肝细胞：高倍镜下呈立方形，胞质粉红色，核大而圆、蓝紫色，核仁清晰。
   • 胆管与血管：门管区可见胆管（蓝色上皮）、肝动脉和门静脉（红色管腔）。

2. 常见病理指标

   • 脂肪变性：胞质内空泡（脂滴溶解），核偏位。
   • 炎症浸润：门管区或肝窦内淋巴细胞聚集。
   • 纤维化：胶原纤维增生（Masson染色更敏感），肝小叶结构破坏。
   • 坏死：核固缩、碎裂，胞质嗜酸性增强。