检测实验丨组织芯片HE染色实验

组织芯片HE染色

组织芯片(tissue ChIP)，也称组织微阵列(tissue microarrays)，是组织芯片是由生物芯片发展延伸而来的一种特殊的生物芯片技术，是生物芯片重要的组成部分，是将许多不同个体组织标本以规则阵列方式排布于同一载玻片上，进行同一指标的原位组织学研究。

组织芯片技术是以形态学为基础的分子生物学新技术，可以做常规病理学的HE 染色、各种免疫组织化学染色、组织化学染色、原位杂交、荧光原位杂交、原位PCR和原位RT-PCR 等, 可在同一张切片上高通量获得组织学、基因和蛋白的表达信息。

一、组织芯片的特点：

①体积小，信息含量大。②获得大量结果。

③减少试验误差。④省时、省力、经济。

⑤有利于原始蜡块的保存

二、材料与仪器：

实验试剂：

无水乙醇、二甲苯、伊红染液、苏木素染液、酸性乙醇分化液、返蓝液、EDTA脱钙液脱钙液、PBS缓冲液、中性树胶

实验仪器：

LEiCA TP-1020脱水机、LEiCA HistoCore MULTICUT病理切片机、包埋机、冻台、组织芯片专用制胚机、专用组织挖取仪、组织芯片包埋机、组织摊片机、烤箱、载玻片、盖玻片、OLYMPUS CKX43-LP显微镜、3DHISTECHP250FLASH全景扫描仪

三、实验步骤：

1、组织包埋

①乙醇脱水：组织经不同浓度的乙醇溶液进行逐级脱水 75％ 85％ 95％ 100％ 100％ ，各级乙醇 1h（注意：骨性及钙化组织需在脱钙液脱钙液中脱钙，待骨组织脱钙后再进行乙醇脱水步骤）；

②透明：组织依次浸泡于2个二甲苯缸中，I缸20min；II缸30min。

③浸蜡：组织依次浸泡于三个石蜡缸中，第一缸1h，第二缸1.5h，第三缸2h；

④制作蜡块毛胚：

利用组织芯片专用制胚机，将适量液态石蜡倒入模具盒中，形成蜡块毛胚的初步形态。

⑤包埋与组织选择：

将浸好蜡的组织块平放入模具盒底部，确保切面方向朝下，待石蜡凝固后去除包埋框。待蜡块完全冷却变硬后，修整蜡块，保留适量的外围石蜡以便于切片。同时，利用显微镜对已有的单组织切片进行观察，从原始蜡块中选择合适区域并标记。

⑥挖取组织：

使用专用挖取器，根据标记区域挖取相应石蜡块中的组织（直径0.5-1.5mm），或直接选择已处理好的小块组织备用。

⑦组织芯片阵列包埋：

按照预先设计好的顺序和数量，将挖取的组织条或已处理好的小块组织以规则的阵列方式排列，并依次包埋入之前制备好的蜡块毛胚中。

⑧最终包埋：

包埋完成：利用专用组织芯片包埋机进行最终包埋，确保所有组织条或小块稳固地固定在蜡块中，完成组织芯片的制作。

2、切片制作

①将预冷蜡块固定于切片机，调整切面与刀口平行，设定刀倾斜度为15°，切片厚度调为4μm。切片后将切片正面置于40℃展片箱中展平。

②待切片摊平后，左手持载玻片一端垂直入水，右手镊子辅助，将切片贴附至玻片三分之二处。

③切片在空气中稍晾后，放入60℃烤片机烘烤1小时，再移至烘箱继续烘烤1小时。

3、HE染色

①石蜡切片脱蜡至水：依次将石蜡切片放入

❶二甲苯Ⅰ20min❷二甲苯Ⅱ20min❸二甲苯III 15min❹无水乙醇Ⅰ5min❺无水乙醇Ⅱ5min❻85%乙醇5min❼75%乙醇5min❽蒸馏水洗。

②细胞核染色：切片入Harris苏木素染5-10min，自来水洗，1%的盐酸酒精分化数秒，自来水冲洗10分钟，蓝化液返蓝5分钟，流水冲洗。

③细胞质染色：切片入伊红染液中染色1-3min。自来水洗。

④脱水透明封片：将切片依次放入

❶75%乙醇5min❷85%乙醇5min❸95%乙醇5min❹无水乙醇Ⅰ5min ❺无水乙醇Ⅱ5min❻二甲苯Ⅰ5min ❼脱水透明，中性树胶封片。 

※实验结果示例：

正常情况下，苏木素染细胞核为蓝色，细胞质着色为粉红色。

组织芯片HE染色