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- 2026年01月26日
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- 文献和实验
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- 提供商：
上海达为科生物科技有限公司
- 服务名称：
普鲁士蓝染色
一、技术原理与化学机制
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核心反应
普鲁士蓝染色基于三价铁离子与亚铁qing化钾（K₄[Fe(CN)₆]）在酸性条件下的特异性反应，生成不溶性的蓝色亚铁qing化铁（Fe₄[Fe(CN)₆]₃），即普鲁士蓝沉淀。反应式如下：4Fe3++3K4[Fe(CN)6]→H+Fe4[Fe(CN)6]3↓+12K+4Fe3++3K4[Fe(CN)6]H+Fe4[Fe(CN)6]3↓+12K+该反应对三价铁高度敏感，可检测单个铁颗粒（灵敏度达1 μg/g组织）。
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生物学意义
- 含铁血黄素：血红蛋白分解后形成的铁储存复合物，主要存在于巨噬细胞中，常见于出血性病变或铁代谢异常。
- 病理标志：染色结果中蓝色颗粒提示铁过载（如血色素沉着症）、出血后铁沉积或肿瘤微环境铁代谢异常。
二、标准化实验流程
（一）样本制备与预处理
| 样本类型 | 固定与处理要点 | 适用场景 |
|---|---|---|
| 石蜡切片 | 10%中性福尔马林固定24小时 → 梯度乙醇脱水 → 石蜡包埋 → 切片（4 μm） → 脱蜡至水 | 常规病理诊断、肿瘤铁代谢研究 |
| 冰冻切片 | 4%多ju甲醛快速固定10分钟 → 蔗糖沉糖 → OCT包埋 → 切片（8-10 μm） | 保留抗原活性，用于快速术中诊断 |
| 细胞涂片 | 甲醇固定5分钟或4%多ju甲醛固定10-20分钟 → 蒸馏水漂洗 | 体外铁转运机制研究 |
（二）染色步骤（以石蜡切片为例）
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染色液配制
- 工作液：2%亚铁qing化钾溶液与1%盐酸按1:1混合（现配现用）。
- 复染液：核固红（0.1%）、中性红或伊红（根据试剂盒选择）。
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操作流程
脱蜡至水普鲁士蓝染色液37℃孵育30分钟蒸馏水冲洗5分钟核固红复染2分钟梯度乙醇脱水二甲苯透明中性树胶封片- 关键参数：
- 染色时间：冰冻切片缩短至15分钟，细胞涂片延长至45分钟。
- 酸性环境：pH 2.4-3.0（盐酸浓度1%），确保铁离子充分释放。
- 结果判读
染色特征 生物学意义 病理关联 蓝色颗粒或团块 三价铁或含铁血黄素沉积 出血性病变、铁过载疾病 红色细胞核 核固红复染（对比染色） 细胞定位参考 背景非特异性染色 常见于陈旧样本或固定不当 需优化脱蜡和冲洗步骤
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文献和实验HE&尼式染色.pdf
。 尼氏染色 染色 观察脑或脊髓等中枢神经系统内神经元尼氏体的变化 LFB髓鞘染色 染色 观察神经髓鞘的形态及变化 普鲁士蓝染色 染色 常用于吞噬细胞内铁粒子的含量和定位 VG染色 染色 显示组织胶原纤维及肌纤维的形态及变化 EVG染色 染色 观察血管弹性纤维的形态及变化 VonKossa染色 染色 观察组织内病理性钙沉积情况
一、样本准备 详见流式细胞术样本制备技术、流式实验样本制备方法及注意事项 收集细胞，200 目筛网过滤，收集滤液，300 g 离心 5 min，弃上清 向细胞中加入适量细胞染色 buffer（或含 1%BSA 的 PBS），用移液枪轻轻吹打细胞重悬 二、细胞计数 用血球计数板或其他仪器对悬液进行计数后，调整细胞浓度约为 1 × 107/mL 三、设置实验分组 四、封闭 Fc 受体 封闭 Fc 受体能减少染色过程中的非特异性染色。 小鼠中，纯化的 CD16/CD32 单抗能和 Fc
