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Timm染色实验

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  • 上海
  • 2026年01月05日
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      上海达为科生物科技有限公司

    • 服务名称：

      Timm染色实验

    一、实验原理

    Timm 染色基于金属自显影术（AMG），利用硫化物与游离锌离子反应生成硫化锌，再通过银显影剂将硫化锌催化还原为可见的黑色银颗粒沉积，从而定位锌离子的分布。该方法对离子状态、疏松结合或螯合状态的锌离子具有特异性，适用于光镜和电镜观察。

    二、实验流程

    （一）样本制备

    1. 动物灌注固定
      • 常用 4% 多ju甲醛或含硫hua钠的固定液经心脏灌注，以保存锌离子的结合状态613。例如，先以 PBS 冲洗血液，再用硫化液（含硫hua钠）灌注使组织发黑，最后用多ju甲醛固定。
      • 脑组织取出后需进一步固定（如 4% 多ju甲醛过夜），再经 30% 蔗糖脱水以防止冰晶损伤。
    2. 切片处理
      • 冰冻切片：厚度通常为 30-50 微米，贴附于多聚赖氨酸处理的载玻片，-20℃保存。
      • 石蜡切片：需经脱水、浸蜡、包埋等步骤，脱蜡后再进行染色。冰冻切片更适合保留抗原活性，而石蜡切片组织形态保存更佳。

    （二）染色步骤

    1. 避光操作：整个染色过程需在暗室或避光条件下进行，以避免银离子提前还原。
    2. 染色液配制：
      • 传统 Timm 染色液含阿拉伯胶、柠檬酸缓冲液、对苯二酚和硝酸银，需现配现用。
      • 商业化试剂盒（如 neo-TIMM）提供预混试剂，简化操作并提升显色效果。
    3. 染色过程：
      • 切片晾干后，置于 26℃水浴或恒温摇床中，用 Timm 显影剂染色 90-150 分钟112。neo-TIMM 技术可缩短至 50 分钟。
    4. 冲洗与复染：
      • 蒸馏水冲洗后，可选尼氏染色复染细胞核（蓝色），以便定位神经元结构。
    5. 封片观察：中性树脂封片后，光学显微镜下可见含锌结构呈黑色颗粒状，如海马苔藓纤维末端、突触囊泡等。

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