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- 2026年08月05日
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1）PCR-ISSR实验路线
前期确认阶段：试验样本类型，数量，引物，签订试验合作合同；
试验费用：DNA提取30元一个样本，PCR+电泳检测10元一个反应，分析单独收费（视工作量而定）；23个样本，10对引物包括引物筛选试验费用大约4000元。
试验阶段：DNA提取，PCR扩增，电泳检测
数据分析：和客户详细沟通，确认分析方案：读取01矩阵；聚类分析；多样性分析；多态位点数(AP)、多态位点百分率( P)、平均等位基因数(Na)、有效等位基因数(Ne)、Nei′s基因多样性指数(H)、Shannon′s信息指数(I) 、遗传分化度(Gst)等。利用NTSYS进行聚类分析。
2）客户提供：
★ 基因组DNA：
●浓度为50-100ng/μL；（每个位点用2-3LμL,请根据引物数计算总体积）
●2%琼脂糖电泳检测有DNA主带，没有降解；
●DNA经过DNA纯化试剂盒或磁珠纯化；
●DNA需溶解在TE或灭菌的去离子水里；
●DNA溶解后，肉眼看不到杂色；
★ 植物材料： 新鲜组织，叶片采用硅胶干燥后或干冰运输；
★ 动物材料： 新鲜组织，无水乙醇封存低温运输；
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文献和实验单一序列信息而使其发展受到限制，同时微卫星标记具有严格的种属特异性也使其应用上受到限制。间简单序列重复（inter-simple sequence repeats，ISSR）是近年发展起来的一类新型分子标记技术，它是根据基因组内广泛存在的微卫星基序设计单一引物，对基因组DNA 进行扩增，扩增的指纹图可以同时提供基因组内多个位点的序列信息。ISSR标记是根据微卫星基序设计单一通用引物对DNA 进行扩增而获得扩增指纹图，它在保留了SSLP标记的优点的同时，有效地克服了SSLP标记中的设计困难的缺点
。 由于微卫星标记在中广泛分布，等位性变异丰富，检测手段简便，稳定可靠而受重视，但是微卫星标记要求已知微卫星两侧单一序列信息而使其发展受到限制，同时微卫星标记具有严格的种属特异性也使其应用上受到限制。 间简单序列重复（inter-simple sequence repeats，ISSR）是近年发展起来的一类新型分子标记技术，它是根据基因组内广泛存在的微卫星基序设计单一引物，对基因组DNA进行扩增，扩增的指纹图可以同时提供基因组内多个位点的序列信息
-Simple Sequence Repeats)是一种新型的分子标记,是于1994年创建的一种简单序列重复区间扩增多态性分子标记。它的生物学基础仍然是基因组中存在的SSR。ISSR标记根据植物广泛存在SSR的特点,利用在植物基因组 中常出现的SSR本身设计引物,无需预先克隆 和测序。用于ISSR-PCR扩增的引物通常为16～18个碱基序列,由1～4个碱基组成的串联重复和几个非重复的锚定碱基组成,从而保证了引物与基因组DNA中SSR的5’或3’末端结合,导致位于反向排列,间隔不太大的重复序列间的基因组节段
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