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病毒现货工具
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汉恒生物
自噬作为时下的研究热点,有非常深远的研究意义。汉恒生物经验丰富的自噬研究团队,可以为您提供自噬研究的整体服务,省时,节力,专业。
一、自噬病毒工具
汉恒生物有多种自噬病毒研究工具可以提供,便于直接感染目的细胞后直观地观察细胞自噬的整体水平;
1)GFP-LC3单荧光自噬指示病毒系统
GFP-LC3病毒系统可高效感染目的细胞,表达GFP-LC3,感染感染后细胞可在荧光显微镜下实时观察自噬的整体水平;
由于电镜耗时长,不利于监测(Monitoring)自噬形成。我们利用LC3在自噬形成过程中发生聚集的现象开发出了GFP-LC3指示技术:无自噬时,GFP-LC3融合蛋白弥散在胞浆中;自噬形成时,GFP-LC3融合蛋白转位至自噬体膜,在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光斑点,一个斑点相当于一个自噬体,可以通过计数来评价自噬活性的高低。汉恒生物已开发出高效的评价用GFP-LC3病毒载体,通过瞬时高效感染细胞,配合活细胞工作站成功评价自噬流。
2)mRFP-GFP-LC3双荧光自噬指示病毒系统
汉恒生物科技(上海)有限公司已开发出用于表达mRFP-GFP-LC3 融合蛋白的病毒产品。mRFP 用于标记及追踪LC3,GFP 的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体,即由于GFP 荧光蛋白对酸性敏感,当自噬体与溶酶体融合后GFP 荧光发生淬灭,此时只能检测到红色荧光。 已多种双荧光病毒系统提供,具体如下:
a)mRFP-GFP-LC3腺病毒系统——可高效感染目的细胞,表达mRFP-GFP-LC3,感染后细胞可在荧光显微镜下实时观察自噬发生过程;
b)mRFP-GFP-LC3慢病毒系统——可以稳定表达持续检测细胞的自噬流检测;
c)mRFP-GFP-LC3腺相关病毒(AAV)系统——最有效的在体自噬流检测工具;
二、自噬检测以及整体服务
1)自噬检测服务
常规自噬检测服务包括western blot检测细胞自噬的水平,优惠提供自噬常规抗体LC3、p62以及beclin1等,我们的研究团队长期为客户提供自噬技术服务,有丰富的自噬研究经验,我们的优势是周期短,质量高;
a)利用Western Blot检测LC3-II/I比值的变化以评价自噬形成。自噬形成时,胞浆型LC3(即LC3-I)会酶解掉一小段多肽,转变为(自噬体)膜型(即LC3-II),因此,LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。(Note:LC3抗体对LC3-II有更高的亲和力,会造成假阳性。方法2和3需结合使用,同时需考虑溶酶体活性的影响。)
b)利用Western Blot检测p62蛋白来评价自噬以及自噬流的强弱:起初自噬所降解的底物被认为是随机的,但是后来的研究表明有些蛋白是seletively降解的,在这些蛋白之中研究的最为透彻的是蛋白p62, p62蛋白水平的多少与自噬流的强弱有着反比例关系)。
2)LC3病毒感染服务
凡购买本公司自噬病毒研究工具,我们承诺免费上门指导细胞病毒感染实验,以确保您的实验效果及安全性,此外我们还会提供腺病毒使用相关资料及文献供您参考;
3)自噬电镜服务
电镜作为自噬检测的金指标,一直是高质量科研论文不可或缺的数据。客户提供样品,我们为其检测细胞或者组织的自噬以及自噬流的水平,并且辅助客户进行数据分析整理,详询汉恒自噬工程师;
由于自噬体属于亚细胞结构,普通光镜下观察不到自噬体的形成,因此,直接观察自噬体需在透射电镜下。Phagophore的特征为:新月状或杯状,双层或多层膜,有包绕胞浆成分的趋势。自噬体(AV1)的特征为:双层或多层膜的液泡状结构,内含胞浆成分,如线粒体、内质网、核糖体等。自噬溶酶体(AV2)的特征为:单层膜,胞浆成分已降解。(autophagic vacuole,AV)
三、自噬研究相关试剂
汉恒生物可以根据您的实验需求为您提供最实用的试剂产品,让您用的放心,省心!
| 产品 | 厂商 | 规格 | |
| 溶酶体抑制剂Hydroxychloroquine (羟氯喹) |
Sigma | 1g | |
| mTOR抑制剂rapamycin | Sigma | 20mM | |
| 自噬抑制剂3-(3-MA) | Sigma | 100mg | |
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文献和实验[1]Chen S, Lu Z, Jia H, Yang B, Liu C, Yang Y, Zhang S, Wang Z, Yang L, Li S, Li J, Yang C. Hepatocyte-specific Mas activation enhances lipophagy and fatty acid oxidation to protect against acetaminophen-induced hepatotoxicity in mice. J Hepatol. 2023 Mar;78(3):543-557.
[2]Li S, Lv J, Li Z, Zhang Q, Lu J, Huo X, Guo M, Liu X, Li C, Wang J, Shi H, Deng L, Chen Z, Du X. Overcoming multi-drug resistance in SCLC: a synergistic approach with venetoclax and hydroxychloroquine targeting the lncRNA LYPLAL1-DT/BCL2/BECN1 pathway. Mol Cancer. 2024 Oct 31;23(1):243.
[3]Li S, Xu H, Liu S, Hou J, Han Y, Li C, Li Y, Zheng G, Wei Z, Yang F, Gao S, Wang S, Geng J, Dai H, Wang C. Targeting Lp-PLA2 inhibits profibrotic monocyte-derived macrophages in silicosis through restoring cardiolipin-mediated mitophagy. Cell Mol Immunol. 2025 Jul;22(7):776-790.
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重磅综述:年发文量近 10000,自噬领域第 4 版研究指南发布
主要报道了 Atg5 的功能,被认为是哺乳动物分子机制研究的第一环,以及参与克隆自噬标志物 LC3,而且制备了一些 ATG 基因敲除老鼠以及 LC3 转基因老鼠。4、Tamotsu Yoshimori (吉森堡),大隅良典的弟子Tamotsu Yoshimori 是自噬领域顶尖级的学者之一,特别是在阐明哺乳动物中自噬的机制做出了杰出的贡献。2000 年,Tamotsu Yoshimori 课题组首次报道了鉴定细胞自噬的金标准 —— 关键蛋白 Atg8 的同源蛋白 LC3,同时还建立了检测哺乳动物中
PI3K 复合物的亚基,Beclin 1 与自噬前体的结合启动自噬体的形成,因此该蛋白是自噬体形成所必须的。而且,在哺乳动物中鉴定的第一个介导自噬的重要基因就是 Beclin 1 基因,它具有抗肿瘤和抗感染的功能。Beclin 2 是与 Beclin 1 相关的卷曲螺旋蛋白。研究认为 Beclin 2 与抗凋亡蛋白 Bcl-2 相互作用并在自噬中发挥作用。自噬体形成自噬体形成主要包括 ATG12 泛素样结合系统以及 LC3/ATG8 蛋白结合系统。ATG5 与 ATG12 的结合是形成自噬体所必须
即 Monodansylcadaverine,单丹磺酰尸胺染色,包括自噬体,所有酸性液泡都被染色,故属于非特异性的。 5. CellTrackerTM Green 染色 主要用于双染色,但其能染所有的液泡,故也属于非特异性的。 自噬相关蛋白定位 在研究自噬相关蛋白时,需对其进行定位。由于自噬体与溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体关系密切,为了区别,常用到一些示踪蛋白在荧光显微镜下来共定位:Lamp-2:溶酶体膜蛋白,可用于监测自噬体与溶酶体融合。LysoTrackerTM 探针:有红或蓝色可选,显示
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