步骤包括:(一)siRNA的设计1. 在设计RNAi实验时,可以先在以下网站进行目标序列的筛选:GenesilAmbion2. RNAi目标序列的选取原则:(1)从转录本(mRNA)的AUG起始密码开始,寻找“AA”二连序列,并记下其3'端的19个碱基序列,作为潜在的siRNA靶位点。有研究结果显示GC含量在45%—55%左右的siRNA要比那些GC含量偏高的更为有效。Tuschl等建议在设计siRNA时不要针对5'和3'端的非 ...
来源:互联网 61069 阅读
sgRNA设计网站介绍sgRNA的在线设计网站有:1、http://crispr.mit.edu/;2、http://www.e‐crisp.org/E‐CRISP/;等网站。这些网站虽然一定程度上满足了部分研究者的需要,但仍然存在很多不足和缺陷。例如:1、数据分析周期长;2、无具体的脱靶数据;3、可供选择物种十分有限。极大的影响了科研工作者的工作效率。鉴于此Biomics及时推出了本地化运行sgRNA软件设计服务,2个工作日内 ...
来源:百奥迈科生物 59260 阅读
第一节 概 述从真核生物的组织或细胞中提取mRNA,通过酶促反应逆转录合成cDNA的第一链和第二链,将双链cDNA和载体连接,然后转化扩增, 即可获得cDNA文库,构建的cDNA文库可用于真核生物基因的结构、表达和调控的分析;比较cDNA和相应基因组DNA序列差异可确定内含子存在和了解转录后加工等一系列问题。总之cDNA的合成和克隆已成为当今真核分子生物学的基本手段。自70年代中叶首例cDNA克 ...
来源:互联网 55821 阅读
在收集到生物材料之后,最好能即可进行RNA制备工作。若需暂时储存,则应以液氮将生物材料急速冷冻后,储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA时,将储存于冷冻柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破细胞,不可以先行解冻,以避免RNase的作用。1. 提取组织RNA时,每50~100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解:提取细胞RNA时,先离心沉淀细胞,每5~106个细胞加1ml Trizo ...
来源:互联网 52995 阅读