双荧光素酶检测的原理和应用
一、荧光素酶报告基因的检测原理荧光素酶(Luciferase)是生物体内催化荧光素(luciferin)或脂肪醛(firefly aldehyde)氧化发光的一类酶的总称,来自于自然界能够发光的生物。自然界存在的荧光素酶来自萤火虫、发光细菌、发光海星、发光节虫、发光鱼、发光甲虫等。细菌荧光素酶对热敏感,因此在哺乳细胞的应用中受到限制。目前,以北美萤火虫虫(Photinus pyralis)来源的荧光素酶基因应用的最为广泛,该 ...
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RNAi及siRNA转染相关实验攻略
RNAi 是一种高效的特异性强的基因表达抑制,应用RNAi生物学机制进行基因功能研究已经成为一种创新性的新方法,人们第一次可以如此快速和方便地抑制细胞中特定基因的表达水平,从而用于分析特定基因在细胞中的功能。RNAi 技术还为新药开发、疾病治疗提供了创新性的方法和途径,有着极其广阔的应用前景。转染是RNAi技术应用的瓶颈。siRNA的转染是RNAi技术最常用和最重要的转染。由于siRNA转染技术应 ...
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RNA干扰技术基本原理与应用
RNA干扰(RNA interference,RNAi),又称转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing,PTGS),是指将特异性同源双链RNA(dsRNA)导入到细胞内,使目的基因的不表达或表达水平下降。
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RNAi表达载体构建
近年来的研究表明一些短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达诱使细胞表现出特定基因缺失的表型 称为RNA干扰(RNA interferenceRNAi).siRNA(small interfering RNAs)就是这种短片断双链RNA分子能够以序列同源互补的mRNA为靶目标降解特定的mRNA.RNAi的发现具有划时代的意义它不仅深入揭示 了细胞内基 ...
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