总RNA的提取(Trizol法提取)

总RNA的提取(Trizol法提取)

关键词: RNA 提取 Trizol法

来源: 互联网

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在收集到生物材料之后,最好能即可进行RNA制备工作。若需暂时储存,则应以液氮将生物材料急速冷冻后,储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA时,将储存于冷冻柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破细胞,不可以先行解冻,以避免RNase的作用。

1. 提取组织RNA时,每50~100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解:提取细胞RNA时,先离心沉淀细胞,每5~106个细胞加1ml Trizol后,反复用枪吹打或剧烈震荡以裂解细胞;

2. 将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在试问15~30℃下放置5分钟;

3. 在上述EP管中,按照每1ml Trizol后加0.2ml氯仿的量加入氯仿,盖上EP管盖子,在手中用力震荡15秒,在室温下(15~30℃)放置2~3分钟后,12000g(2~8℃)离心15分钟;

4. 去上层水相置于新EP管中,按照每1ml Trizol加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇,在室温下(15~30℃)放置10分钟后,12000g(2~8℃)离心10分钟;

5. 弃上清,按照每1ml Trizol加1ml 75% 乙醇进行洗涤,涡旋混合,7500g(2~8℃)离心5分钟,弃上清;

6. 让沉淀的RNA在室温在自然干燥

7. 用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。

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