siRNA转染后目的蛋白没有减低是为什么?

siRNA转染后目的蛋白没有减低是为什么?

王建勇 3 评论 287 阅读

我想用siRNA抑制DMT1,在吉马公司买了三个siRNA,我用的是lipo2000转染,转染前饥饿2h,转染6小时,后换成完全培养基48小时,对照使用转染GAPDH做的,接下来WB检测DMT1,却没有观察到目的蛋白的下降,请问有人遇到过相似的情况吗?应该怎么解决。

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3 条评论
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  •  转染率测了吗?如果载体携带荧光蛋白,可以直接用流式检测转染率看看问题是不是出在这一环节

  • kongguli 2013-04-25  0

    应该先做REALtimePCR检测一下吧,如果确定敲低了,然后再做蛋白水平的检测,而且公司做的siRNA应该会说清楚支持什么水平的检测吧,可能他只保证real time 的检测

  • alaling 2013-04-24  0

    siRNA的直接作用(如果有作用的话)是抑制目标mRNA的表达,所以你应该检测DMT1的mRNA的表达情况,如果mRNA也没有低表达,说明该siRNA设计的不行。你检测蛋白的表达不太科学,毕竟蛋白和mRNA之间还有一道“翻译”的墙隔着,两者的上下调并不一定完全一致。

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