3’RACE 操作步骤及实验心得
一、试剂盒的选择:3’RACE从原理上就能明白,它比5’RACE 要容易得多,所以并不一定需要用进口试剂盒。于是根据 Invitrogen GeneRacer Kit 自己DIY了,效果不错。找来了:Invitrogen的SuperScript III反转酶,TAKaRa LA Taq酶、Pyrobest高保真酶。并根据 Invitrogen GeneRacer Kit ...
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仅扩增全长cDNA末端的高级RACE方法
为了获得全长的cDNA 5’及3’末端序列,许多研究人员使用了称之为cDNA末端快速扩增,或RACE的方法。传统的RACE方法得到的PCR产物含有全长及断裂的cDNA产物。GeneRacer™试剂盒确保您只得到含有全长cDNA末端的完整序列,是您得到更高效的结果并节省您的时间 GeneRacer™的优点 确定一个基因的全长序列对于研究异源转录起 ...
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人APC和TSC-2 cDNA的长5'RACE
利用RACE ,可以很简单地得到mRNA的5'末端序列,然而5'RACE是一个很复杂的技术,它的成功依赖每一步反应的有效完成(图1)。cDNA第一链的合成是由一个反义的基因特异性引物(Gene-specific primer,GSP)来起始的,cDNA第一链纯化后,利用末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal deoxynucleotidyl transferase,TdT)在cDNA的 ...
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【分享】3’RACE 实验心得
引子:从06年12月份开始,断断续续做了一个多月的3’RACE,有了一些心得和体会。期间在丁香园看了很多前辈们分享的经验,受益匪浅。在这里,我就自己的经历略作总结,希望能给像我一样的新人们有点启示,少走些弯路,不当之处欢迎指正。一、试剂盒的选择:3’RACE从原理上就能明白,它比5’RACE 要容易得多,所以并不一定需要用进口试剂盒。原来准备用Takara 3’RACE的试剂盒,可是看了一下它的原理和内容,觉得挺挫的,自己DI ...
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