按步骤用50mg的小鼠肝脏提取总RNA,用预冷的研钵和-70度保存的trizol共研磨组织,氯仿分层,异丙醇沉淀,75%乙醇洗一遍,风干后depc水溶解沉淀,1.5%的琼脂糖电泳220V,20min,结果图如下,各位大神能帮我看看是什么情况吗?
可能是提取的RNA含有杂质或不纯!
主要考虑配胶的问题。胶没有充分混匀存在拖尾。RNA一般都会有降解。跑胶时间太长
同意楼上,应该跑MOPS缓冲液的甲醛变性电泳才能看到28s:18s约2:1,而且RNA也要预先变性出来,不是直接跑DNA胶。
测OD值不是更直接?
我觉得主要问题不像是降解,降解肯定是有,但主要的问题是18S和28S的比例不对,应该是2倍关系,你这个看不大出来,降解的话会出现很明显的条带,5s太亮,另外貌似条带只有3条,不像是有杂质污染等(主要是DNA),可能的主要问题是操作中的丢失,建议严格操作步骤,低温离心,弃去上清液要注意,最后75%酒精处理要尽量在冰上风干,可以用枪头把多余的酒精引流出来,最后我觉得用1%的胶比较好,跑的时间短,降解的机会,程度都要小。
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