一种新的分子诊断技术-- SAT
随着分子生物学研究的进展,越来越多的新技术被开发和应用到核酸检测领域。除PCR技术之外,TMA技术(Transcription mediated amplification)、NASBA技术(nucleic acid sequence-based amplification)、b-DNA技术、LCR技术(ligase chain reaction)以及SDA技术(strand disp ...
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cDNA的制备与检测
总RNA,经寡聚(d丁)纤维素亲和层析柱分离出mRNA,以寡聚(d丁)为引物,经反转录合成双链cDNA。先用反转录酶合成第一条cDNA链;经碱降解作用除去RNA模板后用大肠杆菌DNA聚合酶,以第一条链cDNA的3’末端结构为引物合成第二链,最后形成双链cDNA。(一)仪器和材料紫外线透射仪、移液枪、琼脂糖凝胶电泳系统(二)试剂特异引物、逆转录试剂盒(一)cDNA的合成 ...
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cDNA合成技术
Promega公司的RibocloneR M-MLV(H- ) cDNA合成系统采用M-MLV反转录酶的RNase H缺失突变株取代AMV反转录酶,使合成的cDNA更长。该系统的第一链合成使用M-MLV反转录酶,cDNA第二链合成采用置换合成法,采用RNaseH和DNA聚合酶Ⅰ进行置换合成,最后用T4 DNA聚合酶切去单链末端,方法简便易行。该系统试剂包括:20μg 特异性引物 200& ...
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斑马鱼胚胎的基因表达分析:RAN提取和cDNA合成
详细介绍了分离斑马鱼胚胎全部RNA以及由RNA合成较稳定的cDNA的方法,整个纯化和合成过程均使用商业化的试剂盒。
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