一种新的分子诊断技术-- SAT
随着分子生物学研究的进展，越来越多的新技术被开发和应用到核酸检测领域。除PCR技术之外，TMA技术（Transcription mediated amplification）、NASBA技术（nucleic acid sequence-based amplification）、b-DNA技术、LCR技术（ligase chain reaction）以及SDA技术（strand disp ...
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cDNA的制备与检测
总RNA，经寡聚(d丁)纤维素亲和层析柱分离出mRNA，以寡聚(d丁)为引物，经反转录合成双链cDNA。先用反转录酶合成第一条cDNA链；经碱降解作用除去RNA模板后用大肠杆菌DNA聚合酶，以第一条链cDNA的3’末端结构为引物合成第二链，最后形成双链cDNA。(一)仪器和材料紫外线透射仪、移液枪、琼脂糖凝胶电泳系统(二)试剂特异引物、逆转录试剂盒（一）cDNA的合成 ...
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cDNA合成技术
Promega公司的RibocloneR M-MLV(H- ) cDNA合成系统采用M-MLV反转录酶的RNase H缺失突变株取代AMV反转录酶，使合成的cDNA更长。该系统的第一链合成使用M-MLV反转录酶，cDNA第二链合成采用置换合成法，采用RNaseH和DNA聚合酶Ⅰ进行置换合成，最后用T4 DNA聚合酶切去单链末端，方法简便易行。该系统试剂包括：20μg 特异性引物 200& ...
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cDNA文库组标准流程
第一部分 Total RNA 的提取 一、 试剂配制 准备工作：1、研钵、5ml/10ml/ 25ml移液管、100ml/250ml量筒、250ml/100ml容量瓶、药匙、 试剂瓶等玻璃制品均用锡纸包裹口部，置于烤箱内180℃，烤6小时。2、50ml/1.5ml离心管、枪头等塑料制品用0.1‰DEPC水浸泡过夜后，121℃ 20mins 高压灭菌。3、电泳槽及电泳托、梳子 ...
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