标签： RNA 提取
研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。TRIzolRNA提取方法：（1）操作简单的，提取方便，回收率高；（2）提取的RNA的质量高，对cDNA库，RT-PCR和Northern Blot等分子生物学实验起着很重要的影响。
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Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，采用变性剂即内含异硫氰酸胍酚和β-巯基乙醇等变性物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质，并使蛋白质二级结构消失，细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。β-巯基乙醇主要破坏RNase蛋白质中的二硫键。
细胞裂解后，细胞释放出蛋白质、DNA、RNA等物质，再根据它们在不同的PH值和不同极性溶剂的溶解度不同而使得分开。
（1） 培养细胞： 收获细胞1-5×107，移入1.5ml离心管中，加入1ml Trizol，混匀，室温静置5min。
（2） 组织：取50-100mg组织（新鲜或-70℃及液氮中保存的组织均可）置1.5ml离心管中，加入1ml Trizol充分匀浆，室温静置５min。
2. 加入0.2ml氯仿，振荡15s，静置2min。
3. 4℃离心，12000g×15min，取上清。
4. 加入0.5ml异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置10min。
5. 4℃离心，12000g×10min，弃上清。
6. 加入1ml 75%乙醇，轻轻洗涤沉淀。4℃，7500g×5min，弃上清。
7. 晾干，加入适量的DEPC H2O溶解（65℃促溶10-15min）
2.实验过程必须严格防止RNsae的污染。
一、RNA的定量计算
1. RNA定量方法与DNA定量相似。RNA在260nm波长处有最大的吸收峰。因此，可以用260nm波长分光测定RNA浓度，OD值为1相当于大约40μg/ml的单链RNA。如用1cm光径，用 ddH2O稀释DNA样品n倍并以ddH2O为空白对照，根据此时读出的OD260值即可计算出样品稀释前的浓度：
RNA（mg/ml）=40×OD260读数×稀释倍数（n）/1000
2. RNA纯品的OD260/OD280的比值为2.0，故根据OD260/OD280的比值可以估计RNA的纯度。若比值较低，说明有残余蛋白质存在；比值太高，则提示RNA有降解。
最后溶解样品用DEOC水的量
师兄师姐好，我第一次做提取RNA的实验，不知道最后用DEPC水溶解样品时，用多少的DEPC水呢？
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细胞RNA提取时trizol的量是多少
细胞RNA提取时trizol的量是多少，是按照细胞个数计算trizol的量吗？我百度了一下有的说是根据培养板的面积计算的，到底怎么衡量？
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Trizol提取淋巴细胞总RNA
第一次用Trizol提取淋巴细胞总RNA 我分离完淋巴细胞后 离心沉淀细胞然后加入Trizol去溶我的细胞沉淀 我大概500万个淋巴细胞 加入1mlTrizol 加完Trizol后吹打很多次发现细胞沉淀还是一大团没有溶解 然后我直接冻在-80℃了 是我的细胞数量太多不溶 还是淋巴细胞本来不好溶 我在提RNA时 可以从-80℃里面拿出来再多加点Trizol 把不溶的沉淀再溶吗?
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