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RNA 提取与检测
RNA 提取与检测
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实验方法
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问
这提取的rna还能用吗,最下面条带是啥呀,为啥那么亮?第二张图为什么marker条带越大越不亮?
dxy_mqg1dtg8
RNA从上到下三条带应该为28S,18S,5S,5S这么亮很可能是RNA降解了。
4 回答
982 围观
问
提取骨组织RNA纯度很低
麻黄连翘赤小豆
及时研磨,取出骨组织后短时间内就提取,不然容易降解。用液氮研磨,需要及时加液氮可以减少降解,研磨充分也很重要,再提会好些
2 回答
862 围观
问
如何提高细胞样本rna提取的量
bamboopiggy
注意细胞和trizol的比例,一般情况,6cm皿长满,可以用1ml的trizol,然后收完不要立即提,室温放置半小时,充分裂解后再提。
3 回答
831 围观
问
同一样品能同时提RNA又提蛋白么?这样对WB有无影响?
土井挞克树
能,完全没有问题;这是两个不同的实验
3 回答
352 围观
问
柱提RNA是否可以用Trizol?
juyue2010
试剂盒里,裂解液是trizol优化来的,直接更换不太好
4 回答
719 围观
问
TRIZOL法提RNA浓度低
Dr_劉医生
RNA浓度低可能的原因:提取样本过低总量不足或者提取样本过多裂解不彻底;Trizol法提取时,分层后吸取上清时吸到中间层会带来严重的基因组污染;分层吸取时应当格外小心,不要吸取到中间层;可能是提取样本本身降解,或者是在提取过程中导致的降级;应当尽可能使用新鲜样本进行RNA提取,采集的样本应当及时置于液氮或者-80℃冰箱冻存,并减少反复冻融。盐及有机溶剂残留
6 回答
5870 围观
问
RNA 提取过程中 RNA 浓度过低是否会影响后续逆转录和 qPCR?
YJMYJ
太低了吧,至少得1000吧
1 回答
3459 围观
问
提取小老鼠rna,如果rna量过大,应该怎么溶解?
bamboopiggy
用DEPC水或无酶无菌水直接溶解就好,溶解完了,分装保存。注意测浓度的时候,要在机器的浓度范围内,否则会出现很大偏差。
3 回答
898 围观
问
提rna时,检测rna浓度时测量的260/280以及260/230数值对后续逆转录以及扩增有影响吗
棒打鲜橙girl
我们实验室一般只看260/280,代表RNA纯度,1.8-2.0最佳,这样跑出来的pcr效果更好,结果较准确
6 回答
25081 围观
问
单细胞rna-seq测序的数据分析流程和bulk的rna-seq一样么。
dxy_gwrp7ndq
bulk的表达矩阵是reads比对到基因的数目;单细胞的表达矩阵是reads比对到某个细胞的某个基因的数目(barcode用来区分细胞;UMI用来区分转录本/基因)
1 回答
827 围观
问
为什么提取RNA的时候一定要分层?如果不用分层就能提取出RNA,这样在吸取含有RNA的水相时就不怕污染了。
whilt-shirt
提RNA过程中分层是因为加入氯仿,氯仿会从trizol中萃取RNA,在吸上层的时候可以考虑不完全吸掉。如果经费充足的话可以考虑柱法提RNA,这种方法污染小。
3 回答
1163 围观
问
RNA提取时,OD260/OD280比值偏低
仗剑走江湖
比值偏低,说明有蛋白污染;补救办法trizol法上清吸取少点300ul即可;异丙醇吸干净;酒精挥发干
4 回答
5238 围观
问
细菌提RNA,需要培养到什么时期最好?
lzy必有我师
1.最好新鲜组织,这样RNA提取的效果比较好,这是肯定的。2. 如果不是新鲜的(最好在半年之内,-80℃或者液氮中冻存的)组织,注意不要反复冻融,从冰冻状态拿到0-4℃,注意不要拿到常温,待组织解冻后,用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织,称重后,放到预冷的匀浆器中,然后加入一定量的TRIZOL试剂,然后匀浆。注意:速度不要太快,要匀一会挺一会,否则由于摩擦产热,RNA遇热会加速降解。如果一次做多个
4 回答
1156 围观
问
RNA提取中的问题
老鹰归来
75%的乙醇哦亲,室温即可哦亲。配置75%乙醇的水必须经过DEPC处理哦亲。原理:之所以用乙醇是为了让RNA析出哦亲,之所以不用纯乙醇而用75的乙醇是为了溶解RNA提取过程中的胍盐等可溶杂质哦亲,用纯乙醇而不用75的乙醇洗涤RNA会导致最后260/230的比值小于2.0哦亲。260/230低于2.0可以做反转,定量,但是不可以用于测序哦亲。提问者:那也就是说最后一步非要用带水的乙醇对吧,其实真正起
2 回答
1741 围观
问
RNA提取,rtPCR和qPCR碰到的问题
wangqing2020
取完一个标本后,趁研钵还是很冷的状态下,向研钵中加一勺(用不锈钢的小汤勺即可)液氮,立刻用研棒搅动样品,趁样品飘在液氮中,将样品和液氮一起倒到锡箔纸做成的小碗中(用来收集废样,便于丢弃)。如果一次洗不干净,可以多洗两遍,我都是这样做的,一般洗两次就很干净了。
2 回答
1700 围观
问
如何灭活内源的RNA酶,以防止RNA降解?
丁香实验
以下3个方法均可有效使内源RNA酶失活:(1)用含离液(如胍盐)的细胞裂解液收获样品,并立即匀浆。(2)用液氮瞬间冻结样品。值得特别注意的是:组织块必须保证足够小,在浸入液氮的瞬间就能冻结,以确保瞬间令RNA酶失活(3)立即将样品置于RNAlater? Tissue Collection:RNA Stabilization Solution中。它是一种水相、无毒的收集试剂,能立即稳定并保护完整、未
1 回答
1447 围观
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