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RNA 提取与检测
RNA 提取与检测
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问
这提取的rna还能用吗，最下面条带是啥呀，为啥那么亮?第二张图为什么marker条带越大越不亮?
dxy_mqg1dtg8
RNA从上到下三条带应该为28S，18S，5S，5S这么亮很可能是RNA降解了。
4 回答
1018 围观
问
提取骨组织RNA纯度很低
麻黄连翘赤小豆
及时研磨，取出骨组织后短时间内就提取，不然容易降解。用液氮研磨，需要及时加液氮可以减少降解，研磨充分也很重要，再提会好些
2 回答
876 围观
问
如何提高细胞样本rna提取的量
bamboopiggy
注意细胞和trizol的比例，一般情况，6cm皿长满，可以用1ml的trizol，然后收完不要立即提，室温放置半小时，充分裂解后再提。
3 回答
848 围观
问
同一样品能同时提RNA又提蛋白么？这样对WB有无影响？
土井挞克树
能,完全没有问题;这是两个不同的实验
3 回答
364 围观
问
柱提RNA是否可以用Trizol？
juyue2010
试剂盒里，裂解液是trizol优化来的，直接更换不太好
4 回答
738 围观
问
TRIZOL法提RNA浓度低
Dr_劉医生
RNA浓度低可能的原因：提取样本过低总量不足或者提取样本过多裂解不彻底;Trizol法提取时，分层后吸取上清时吸到中间层会带来严重的基因组污染;分层吸取时应当格外小心，不要吸取到中间层；可能是提取样本本身降解，或者是在提取过程中导致的降级;应当尽可能使用新鲜样本进行RNA提取，采集的样本应当及时置于液氮或者-80℃冰箱冻存，并减少反复冻融。盐及有机溶剂残留
6 回答
5899 围观
问
RNA 提取过程中 RNA 浓度过低是否会影响后续逆转录和 qPCR？
YJMYJ
太低了吧，至少得1000吧
1 回答
3507 围观
问
提取小老鼠rna,如果rna量过大，应该怎么溶解？
bamboopiggy
用DEPC水或无酶无菌水直接溶解就好，溶解完了，分装保存。注意测浓度的时候，要在机器的浓度范围内，否则会出现很大偏差。
3 回答
924 围观
问
提rna时，检测rna浓度时测量的260/280以及260/230数值对后续逆转录以及扩增有影响吗
棒打鲜橙girl
我们实验室一般只看260/280，代表RNA纯度，1.8-2.0最佳，这样跑出来的pcr效果更好，结果较准确
6 回答
25431 围观
问
单细胞rna-seq测序的数据分析流程和bulk的rna-seq一样么。
dxy_gwrp7ndq
bulk的表达矩阵是reads比对到基因的数目；单细胞的表达矩阵是reads比对到某个细胞的某个基因的数目(barcode用来区分细胞；UMI用来区分转录本/基因)
1 回答
840 围观
问
为什么提取RNA的时候一定要分层？如果不用分层就能提取出RNA，这样在吸取含有RNA的水相时就不怕污染了。
whilt-shirt
提RNA过程中分层是因为加入氯仿，氯仿会从trizol中萃取RNA，在吸上层的时候可以考虑不完全吸掉。如果经费充足的话可以考虑柱法提RNA，这种方法污染小。
3 回答
1183 围观
问
RNA提取时，OD260/OD280比值偏低
仗剑走江湖
比值偏低，说明有蛋白污染；补救办法trizol法上清吸取少点300ul即可；异丙醇吸干净；酒精挥发干
4 回答
5326 围观
问
细菌提RNA，需要培养到什么时期最好？
lzy必有我师
1.最好新鲜组织，这样RNA提取的效果比较好，这是肯定的。2. 如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80℃或者液氮中冻存的）组织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4℃，注意不要拿到常温，待组织解冻后，用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织，称重后，放到预冷的匀浆器中，然后加入一定量的TRIZOL试剂，然后匀浆。注意：速度不要太快，要匀一会挺一会，否则由于摩擦产热，RNA遇热会加速降解。如果一次做多个
4 回答
1177 围观
问
RNA提取中的问题
老鹰归来
75%的乙醇哦亲，室温即可哦亲。配置75%乙醇的水必须经过DEPC处理哦亲。原理：之所以用乙醇是为了让RNA析出哦亲，之所以不用纯乙醇而用75的乙醇是为了溶解RNA提取过程中的胍盐等可溶杂质哦亲，用纯乙醇而不用75的乙醇洗涤RNA会导致最后260/230的比值小于2.0哦亲。260/230低于2.0可以做反转，定量，但是不可以用于测序哦亲。提问者：那也就是说最后一步非要用带水的乙醇对吧，其实真正起
2 回答
1770 围观
问
RNA提取，rtPCR和qPCR碰到的问题
wangqing2020
取完一个标本后，趁研钵还是很冷的状态下，向研钵中加一勺（用不锈钢的小汤勺即可）液氮，立刻用研棒搅动样品，趁样品飘在液氮中，将样品和液氮一起倒到锡箔纸做成的小碗中（用来收集废样，便于丢弃）。如果一次洗不干净，可以多洗两遍，我都是这样做的，一般洗两次就很干净了。
2 回答
1712 围观
问
如何灭活内源的RNA酶，以防止RNA降解？
丁香实验
以下3个方法均可有效使内源RNA酶失活：（1）用含离液（如胍盐）的细胞裂解液收获样品，并立即匀浆。（2）用液氮瞬间冻结样品。值得特别注意的是：组织块必须保证足够小，在浸入液氮的瞬间就能冻结，以确保瞬间令RNA酶失活（3）立即将样品置于RNAlater? Tissue Collection：RNA Stabilization Solution中。它是一种水相、无毒的收集试剂，能立即稳定并保护完整、未
1 回答
1466 围观
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