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        柱提RNA是否可以用Trizol?

        相关实验:用T4 RNA 连接酶连接 RNA 分子

        user-title

        dxy_ee91avc4

        请问各位,如果想把柱提法的裂解液换成Trizol,后续步骤建议如何改进呢?

        是悬浮淋巴细胞,每个样大概100万个细胞左右。用柱提法提出来的纯度够,但是浓度非常低(有的甚至只有个位数)

        想两者结合,使用柱提法,然后把裂解液换成裂解能力更强的Trizol。

        试过几次,直接把柱提法步骤里的裂解液换成了Trizol(其他步骤不变),测出来的浓度够了,但纯度很低(A260/280大概1.5-1.8),硬着头皮PCR了也可以跑出来,但是结果可能不可信。

        所以想请教各位大神指点!是否有什么改进的方法!

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        4 个回答

        user-title

        juyue2010

        有帮助

        试剂盒里,裂解液是trizol优化来的,直接更换不太好

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        你可以加上纯化步骤之后再试一试。

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        我们用柱式提取法都是为了能提高浓度,你的浓度低可能是elute的时候没有把RNA完全溶解下来,建议把elute buffer 预热45度左右,可以明显提高RNA的浓度。

        user-title

        Dr_劉医生

        有帮助

        柱提RNA可以用Trizol法,纯度低的原因可能还是悬浮细胞上样量不够

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