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做 WB,一抗和 marker 怎样选取?
xzmcjxj
个人觉得一抗的话是abcam,cell signaling technology,santa cruz,bioworld这几家公司的不错 ,也比较常用,购买一抗的时候要注意它的试用范围,比如说使用的物种,主要就是H\M\R,指的是人、小鼠和大鼠,还有就是它适合做哪些实验,最常规的就是WB\IF\IMH等。而marker的话就是要根据自己的目的蛋白的大小来决定了,一般选接近的,如果分子量比较小的话就
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问
组织切片做免疫荧光,背景色太重怎么办?
shy890726
背景色成因分两方面 一、组织切片因染色过程或组织非特异荧光而出现的背景色 二、拍照时因硬件设施或取景器设置而出现的背景色。针对第一种问题有以下几点建议:1. 采用高品质的多聚甲醛固定减少普通甲醛的自发萤光 2. 切片厚度减薄 3. 切片贴片后流水冲洗干净减少杂质荧光 4. 一抗以及二抗漂洗干净!(非常重要) 5. 选用高品质封片介质。针对第二种问题有以下几点建议:1. 曝光时间的控制 2. 暗室操
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问
ECL 试剂盒荧光特别弱怎么办?
hbzwwxclxq
一般ECL发光液我们实验室是在用之前从4度取出配好需要的量,然后马上放回4度冰箱,很多人是拿出来一直常温下放着等曝完光再放回冰箱,这样可能就会影响到效果哦,还有就是注意有效期吧。。。。
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问
细胞未出凋亡,可能的原因是什么?
alaling
如果你确定这个药物对正常人的窗口上限是200微摩尔,那么这个细胞系很可能就是对你的药物是耐药的。究其原因有两个,一个是其天生耐药,另外一个,也是最大的可能就是这个细胞株是经过低浓度药物培养起来的耐药株。所以传代越多不太会产生耐药性,但如果你这本身是低浓度药物培养起来的耐药株,就会出现耐药 的情况。由于很多细胞系经过无数传代,其中又经过无数处理,记录不清的情况非常常见,所以细胞很容易出现类似的耐药
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问
为什么 DAB 显色实验的条带弄干后总是白色?
200210lee
浓度过高,过曝了。建议降低样品,一抗,二抗浓度。
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问
实验设计中的问题 :提取膜蛋白(受体蛋白)后做western好出结果么?
尼克酰胺腺嘌呤二
无论是提取过程还是WB过程都需要做仔细一些,可以用一些好的产品。
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问
目的基因片段电泳鉴定无结果是为什么?
hl16010921
1.先对比引物序列,看序列是否真的评分很高(文献的也要自己重新查,文献审稿时引物错误是没人挑的)2.引物质量很重要,PCR不出结果,可以不付帐。换一家试试。有的公司引物合成时好时坏。3.引物的保存不当。4.PCR体系中有强的抑制Taq的物质(抽提污染或水的质量不高)5.是否有引物二聚体?有的话证明PCR还在进行,但条件不好。如果没有证明PCR没进行。6.dNTP降解也有可能。7。ULYSSEESW
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问
用乙醇沉淀质粒时只能看到一点点沉淀是什么原因?
yeselanshan
没有盐,还有就是加乙醇后一定得混匀。
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问
western blot 实验中组织提取蛋白最小量是多少?
勇者无疆2011
这个要看你的目的蛋白在你的这个标本--肺动脉里面表达的量的多少了,如果太少了,那估计是不行哦,但表达丰度较高,那肯定可以了。
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问
在 NCBI 查询到人类的 CD209 有好多条 mRNA 该如何选取?
dengchch
有好多条mRNA是因为这个基因有不止一个转录本,一般情况下是选择最长的转录本进行克隆,当然如果别人有报道说不同的转录本有不同的功能的话最好还是都克隆并研究一下。基因的编码区和启动子序列在NCBI网站上都能查到,你搜索时用gene这个选项卡,然后搜你的基因,在结果中选人的该基因,然后分别去找相关信息。其中编码区就是CDS。设计引物时,如果你要克隆基因,那肯定引物要在CDS区两端,因为你要扩的是完整的
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问
电泳,有时抛出两条条带,有时是一条条带,两条条带分子量相差不大,可能是什么原因造成的?
hl16010921
1.电泳的原因,相差不大的蛋白有时没有分开。染色,脱色未到最佳等。就是两条带没分开,或丢失一条。2.样品原因。部分降解,修饰(磷酸化,乙酰化等),相近蛋白的干扰。3.样品原因的话,某一样品结果是不可逆的,一条带变两条,而后该样品一直是两条带。电泳的问题是随机的,忽而一条,忽而两条。4.电泳,问题可能大。稳定电泳条件,特别是防止局部过热。
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问
RT-PCR 特异性,实验组和阳性及阴性对照组最后都出现了目的条带是为什么?
hl16010921
1.人或哺乳动物的保守基因可能是操作者带来的污染。(这点很容易被忽视,尤其是老手)2.多样品时加样失误,用排管或板时有时出现。3.试剂或水的污染尤其是公共试剂。4.电泳点样或上样时混入。5.误将引物二聚体当做目的带了(目的带低于100bp时或目的带没出,无marker时可能性大)6.都换新的重做。同时PCR时一定带手套,做实验前拖地,清洁台面,把头发,胡子包一下,不要有人员走来走去。
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问
求无进展生存率(DFP)的计算方法?
elite_xy
简单说,就是一个病例从你给他治疗开始算,如果你每2个月做一次随访的话,如果第6个月病例的病情有所发展,那么他的PFS就是4个月。当然有些病人的病例不会有发展,统计一下无发展的人数,除以病例数就可以了
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问
在 DNA 的退火过程中,不小心把温度搞到 45℃(要求55℃)了,怎么办?
elite_xy
毫无影响,希望你不是说退火温度设定到了45℃
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问
鼻咽癌 CNE2 细胞培养过程中形态为啥会变(梭型变成多边形)?
dengchch
其实CNE2也不是完全是梭形吧。有的是梭形,有的多边形,尤其是像CNE2这种细胞。我们研究部有挑过CNE2细胞的单克隆,发现一些克隆是主要呈梭形,一些则呈现多边形或不规则形状,梭形的细胞一般恶性较强。所以CNE2可以认为是一个混杂了多种类型细胞的细胞系,这其实也符合癌症细胞异质性的理论。我觉得只要细胞状态正常,性状与之前基本一致,确定没有其它细胞污染,就可以用来做实验。
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问
提取多少核酸够用?
ULYSSEESWB
做预实验啊。。。提取rna至少需要6孔板级别的,至少2孔以上吧,细胞瓶绝对是够了
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问
PCR 结果出现弥散现象的原因?
ziye_1988
有很多原因啊,比如说模板加的太多了,建议体系参考酶的说明书,具体原因和解决办法参照分子克隆上册PCR那一张(好像是第八章)~
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问
冰冻切片免疫双染的背景问题
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问
家兔颈总动脉如何提取 RNA
liona_lin
您可以尝试用研钵加液氮研磨法提取
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问
见不到荧光是为什么?
zhangwan8686
主要问题是抗体浓度和一抗二抗结合不够,尝试提高二抗浓度,延长二抗反应时间,另外,一抗可以做梯度实验,找寻一抗二抗最佳比例
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