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实验问答

26,757,842 科研人在看

问做 WB，一抗和 marker 怎样选取？

xzmcjxj

个人觉得一抗的话是abcam，cell signaling technology,santa cruz,bioworld这几家公司的不错，也比较常用，购买一抗的时候要注意它的试用范围，比如说使用的物种，主要就是H\M\R，指的是人、小鼠和大鼠，还有就是它适合做哪些实验，最常规的就是WB\IF\IMH等。而marker的话就是要根据自己的目的蛋白的大小来决定了，一般选接近的，如果分子量比较小的话就

7 回答7286 围观

问组织切片做免疫荧光，背景色太重怎么办？

shy890726

背景色成因分两方面一、组织切片因染色过程或组织非特异荧光而出现的背景色二、拍照时因硬件设施或取景器设置而出现的背景色。针对第一种问题有以下几点建议：1. 采用高品质的多聚甲醛固定减少普通甲醛的自发萤光 2. 切片厚度减薄 3. 切片贴片后流水冲洗干净减少杂质荧光 4. 一抗以及二抗漂洗干净！（非常重要） 5. 选用高品质封片介质。针对第二种问题有以下几点建议：1. 曝光时间的控制 2. 暗室操

4 回答7545 围观

问胚胎细胞凋亡检测用哪种试剂盒比较好？

lijuan2008_李娟

Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒，不错，实验室都在用

2 回答1301 围观

问ECL 试剂盒荧光特别弱怎么办？

hbzwwxclxq

一般ECL发光液我们实验室是在用之前从4度取出配好需要的量，然后马上放回4度冰箱，很多人是拿出来一直常温下放着等曝完光再放回冰箱，这样可能就会影响到效果哦，还有就是注意有效期吧。。。。

6 回答3276 围观

问细胞未出凋亡，可能的原因是什么？

alaling

如果你确定这个药物对正常人的窗口上限是200微摩尔，那么这个细胞系很可能就是对你的药物是耐药的。究其原因有两个，一个是其天生耐药，另外一个，也是最大的可能就是这个细胞株是经过低浓度药物培养起来的耐药株。所以传代越多不太会产生耐药性，但如果你这本身是低浓度药物培养起来的耐药株，就会出现耐药的情况。由于很多细胞系经过无数传代，其中又经过无数处理，记录不清的情况非常常见，所以细胞很容易出现类似的耐药

6 回答3896 围观

问为什么 DAB 显色实验的条带弄干后总是白色？

200210lee

浓度过高，过曝了。建议降低样品，一抗，二抗浓度。

4 回答3270 围观

问实验设计中的问题：提取膜蛋白（受体蛋白）后做western好出结果么？

尼克酰胺腺嘌呤二

无论是提取过程还是WB过程都需要做仔细一些，可以用一些好的产品。

2 回答2910 围观

问如何让分离胶面平整？

名闻天下

可能你的胶槽不平，第二你的压胶的液体太少，至少1ml，第三，你必须要等胶干了才能晃动胶槽，夏天至少30min，冬天更久50min，我一般加的纯水好像没什么事。。

2 回答3951 围观

问求助啊 Promega 的 Psi-check 2 vector 的测序引物是什么呀

iternol

psiCHECK-F GCAACTACAACGCCTACCTTCGG psiCHECK-R CGAAAAGGTCACACTCTGGGGCG你再网上找到质粒序列后就可以找到引物的位置了

2 回答3229 围观

问western blot 实验中组织提取蛋白最小量是多少？

勇者无疆2011

这个要看你的目的蛋白在你的这个标本--肺动脉里面表达的量的多少了，如果太少了，那估计是不行哦，但表达丰度较高，那肯定可以了。

2 回答3835 围观

问野生型能不能像转基因小鼠一样繁育？

changyueli

1.野生型的国内购买就可以了；2.野生型的当然能像转基因小鼠一样繁育，而且最好是保持相同的饲养条件。

2 回答4629 围观

问能够染大鼠MCAO的脑切片么？能够观察的细胞是哪类的？

200210lee

有多糖的细胞或组织

1 回答1557 围观

问做转化后菌P时直接挑取单菌落进行PCR，有哪位大侠做成功了？

我是金博士

你是有啥问题吗？转化挑取单菌落PCR，菌落不要太多，其余就按常规PCR流程。一次性多P个几管，分别从不同的平板上挑。

1 回答3078 围观

问WB 的试剂准备应该自己配制还是买试剂盒？能给点建议吗？

momimimimomi

做WB实验比较花钱的是一抗，国外进口的1支大概在3000元-5000元之间不等（根据你的指标而定），二抗价格相对便宜很多，如果使用荧光二抗的话，1瓶Dylight 2000元的可以使很久。剩下的试剂均可以单独购买，Marker、蛋白酶抑制剂、磷酸化蛋白抑制剂最好买进口的，价格可能在1000元-3000元左右（根据公司、规格），剩下买国产的即可，如裂解液、电泳液、电转液、Tris-Hcl、SDS-P

2 回答2227 围观

问从大鼠股骨中用液氮研磨后提取蛋白也是跟常规的组织提取蛋白用的试剂一样吗？

南瓜先生86

如果是提取核蛋白还需要加提取核蛋白的裂解液

2 回答2047 围观

问如果用小鼠肝细胞免疫兔子应该怎么进行或是要怎样处理肝细胞呢？

huangjuan711

我好像只听过单克隆抗体，大三医学生路过。要得到抗体，自然是相应抗原的诱导了，哦，好像是先得到能产生目的抗体的基因，在整合到受体细胞基因，也有质粒携带的，然后抗原刺激，看是否表达目的抗体，再行筛选克隆成功的受体细胞，传代培养。有专业书籍介绍的吧

1 回答1172 围观

问细胞划痕试验的第 3 步是否要去除培养基？

yiyao111

划痕前是不倒培养基的，划痕后再倒掉培养基加PBS清洗后加吴学谦培养基；细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。因此是整个培养皿都加培养基的，观察部位是划痕而已

1 回答5277 围观

问为什么 SD 大鼠神经干细胞培养时候会出现贴壁现象？

kudy

一般不会贴壁，贴壁的多是神经元样及胶质细胞

3 回答1478 围观

问FISH探针设计问题

3876 围观

问见不到荧光是为什么？

zhangwan8686

主要问题是抗体浓度和一抗二抗结合不够，尝试提高二抗浓度，延长二抗反应时间，另外，一抗可以做梯度实验，找寻一抗二抗最佳比例

1 回答2343 围观

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