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        RT-PCR 特异性,实验组和阳性及阴性对照组最后都出现了目的条带是为什么?

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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        sunkiehousq

        这段时间做 RT-PCR,阳性对照组用的是带有目的基因的质粒,阴性对照加的是平常的灭乐菌的蒸馏水,但是实验组和阳性及阴性对照组最后都出现了目的条带?是不是水污染了?还是其他地方出现了错误?
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        3 个回答

        user-title

        hl16010921

        有帮助
        1.人或哺乳动物的保守基因可能是操作者带来的污染。(这点很容易被忽视,尤其是老手)2.多样品时加样失误,用排管或板时有时出现。3.试剂或水的污染尤其是公共试剂。4.电泳点样或上样时混入。5.误将引物二聚体当做目的带了(目的带低于100bp时或目的带没出,无marker时可能性大)6.都换新的重做。同时PCR时一定带手套,做实验前拖地,清洁台面,把头发,胡子包一下,不要有人员走来走去。
        user-title

        ULYSSEESWB

        有帮助
        阴性对照条带,必然是试剂污染,而且不一定是水。如果不心疼试剂,建议试剂换新重做。。。
        user-title

        zff2010

        有帮助
        可能原因:加入模板的枪头污染了阴性对照体系导致。
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