组织切片做免疫荧光，背景色太重怎么办？

我一般采取以下方法：1.适当延长封闭时间，每次洗涤时要充分（个人认为这点洗涤很重要，不是洗的时间足够长就可以的，比如15miundefined3次就不如5miundefined5次），尽量减少非特异性染色； 2.切片尽量薄。 3。共聚焦拍照的话，配套软件很好，可以修得很漂亮。

背景色成因分两方面 一、组织切片因染色过程或组织非特异荧光而出现的背景色 二、拍照时因硬件设施或取景器设置而出现的背景色。 针对第一种问题有以下几点建议：1. 采用高品质的多聚甲醛固定减少普通甲醛的自发萤光 2. 切片厚度减薄 3. 切片贴片后流水冲洗干净减少杂质荧光 4. 一抗以及二抗漂洗干净！（非常重要） 5. 选用高品质封片介质。 针对第二种问题有以下几点建议：1. 曝光时间的控制 2. 暗室操作

1.切片太厚导致染色背景重。 2.染色时间没有掌控好。

工作站可以减少背景色。诚恳的建议，感觉你的confocal都已经拍好了，你的背景色很重，说明是非特异染色，因为在拍的时候你的背景色强弱都是可调的。估计是你的背景色调弱后，你就什么都看不到了，所以为了突显效果，加强了背景色。 解决方案：1.重做。 2.如果重做还不行，说明你的实验方法有问题。 3.PS调整颜色通道可以改