组织切片做免疫荧光，背景色太重怎么办？
asdfg1983
组织切片做免疫荧光，背景色太重，在共聚焦显微镜下激发都是一片一片的光，在倒置显微镜下看倒还可以。怎么去除背景色？
4 个回答
tinysweet
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我一般采取以下方法：1.适当延长封闭时间，每次洗涤时要充分（个人认为这点洗涤很重要，不是洗的时间足够长就可以的，比如15miundefined3次就不如5miundefined5次），尽量减少非特异性染色；
2.切片尽量薄。
3。共聚焦拍照的话，配套软件很好，可以修得很漂亮。
shy890726
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背景色成因分两方面 一、组织切片因染色过程或组织非特异荧光而出现的背景色 二、拍照时因硬件设施或取景器设置而出现的背景色。
针对第一种问题有以下几点建议：1. 采用高品质的多聚甲醛固定减少普通甲醛的自发萤光 2. 切片厚度减薄 3. 切片贴片后流水冲洗干净减少杂质荧光 4. 一抗以及二抗漂洗干净！（非常重要） 5. 选用高品质封片介质。
针对第二种问题有以下几点建议：1. 曝光时间的控制 2. 暗室操作
MINGMING1987621
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1.切片太厚导致染色背景重。
2.染色时间没有掌控好。
elite_xy
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工作站可以减少背景色。诚恳的建议，感觉你的confocal都已经拍好了，你的背景色很重，说明是非特异染色，因为在拍的时候你的背景色强弱都是可调的。估计是你的背景色调弱后，你就什么都看不到了，所以为了突显效果，加强了背景色。
解决方案：1.重做。 2.如果重做还不行，说明你的实验方法有问题。 3.PS调整颜色通道可以改
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