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        实时荧光定量PCR反应

        user-title

        cq2019

        实时荧光定量PCR反应测基因表达的时候,有些是用的两步法,有些是用的三步法,到底哪一个好些呢?

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        2 个回答

        user-title

        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        两步法,三步法并没有本质区别,信号的读取都是在每一个延长结束后读取。定量PCR一开始的时候也是三步法的。

        两步法,是因为设计引物的时候把退火温度设为酶的工作温度,而且定量PCR的产物都很短,需要的时候都短,所以两步法更方便。三步法的话,花的时间长,不利于快速实验。

        user-title

        府宅

        有帮助

        如果引物设计时的Tm值接近60度(比如用ABI的primerexpress设计的引物),就直接用两步法;

        如果Tm值不太符合两步法要求,即不接近60度,还是三步法好些!

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