实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问请问免疫组化加热容易脱片怎么办呀？

府宅

1.自己做明胶防脱片2.买商品硅化的片子3.有正离子片子，是最好的防脱片

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问chip-seq实验相关问题

txs900416

单克隆或多克隆抗体都可用于ChIP实验。单克隆抗体只识别目的蛋白的单个表位，因此有非常高的特异性，和较低的非特异结合、较低的背景和杂带，而且生产批次稳定。但是单克隆抗体识别的表位可能位于蛋白与DNA结合位置或因联过程而被掩蔽，这种情况就导致抗体不能结合该表位导致实验失败，但这种情况通常极少出现。多克隆抗体识别多个抗原表位，可以更有效地结合目的蛋白、成功率更高；但非特异结合也增加，导致杂带更多。

1 回答307 围观

问western blot实验浓缩胶的作用是什么，多少厚度的浓缩胶合适呢？

txs900416

浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选pH6.8的TRIS/HCL缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后，HCL解离成氯离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷，因此一起向正极移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。电泳开始时氯离子泳动率最大，超过蛋白，因此在后面形

1 回答1674 围观

问免疫组化的需要进一步结果验证么

txs900416

一般组化做的同时会做一个isotype control，从而排除假阳性的干扰，从而无需做进一步结果验证

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问请问elisa实验中37℃孵育时，是放水浴锅还是恒温箱比较合适？

txs900416

水浴锅和恒温箱的区别在于湿度不同，理论上水浴锅可以防止液体挥发，但存在的问题是水浴不容易放稳，建议将elisa酶标条放湿盒中再放恒温箱以减少挥发

2 回答3007 围观

问我想请教一下ELSIA实验中结果阴性、阳性对照显色差距较小怎么办？

dxywode

可能原因：稀释不准、加样量不准。加样时各孔均被污染；底物不新鲜，配制时间过长或被污染；试剂效价下降或超过了试剂的有效使用期；配制溶液的水质有问题。

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问纳米抗体作为酶联免疫实验试剂盒的潜力？

dxywode

和传统抗体相比，纳米抗体分子量小，结构简单。而得益于分子量小的优势，纳米抗体制备更进一步具有多个特征，使得纳米抗体在新药物发现方面表现出巨大的潜力：高耐热性和稳定性；高抗原结合性；较强的组织穿透力；高水溶性、高表达性。因纳米抗体分子量小、结构简单，由单一的基因编码，所以它很容易在微生物中合成，能在噬菌体、酵母等微生物中大量的表达，而且其相对价格低廉、可进行大规模生产，易于普及和应用。

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问组合应用免疫抑制剂＋人狂犬病免疫球蛋白（HRIG）能否治愈狂犬病？

dxywode

这些只是实验结果，还只是很小的研究进展，毕竟距离应用到人类临床研究，犬类的动物实验都可能与小鼠具有不同的结果。但毕竟指示了狂犬治疗的可能性，推动了一个方向的发展。

2 回答363 围观

问人体免疫球蛋白是怎么样形成过程，跟强化？

txs900416

B细胞在接受抗原刺激后迅速分化增殖，除一部分分化记忆细胞外，其余分化为浆细胞。浆细胞在内质网和多聚糖体均显著增加，大量合成Ig分子。抗体主要通过类别转化强化，可转换成稳定、半衰期长的ig

3 回答847 围观

问小鼠外周血少量免疫细胞怎么测定？

txs900416

小鼠外周血少，全取后要尽量用淋巴细胞分离液分离再做进一步检测，又损失了很多细胞，还要进行pma/ion/bfa联合刺激，细胞又会损失。建议取小鼠脾脏进行实验，可获得较多的淋巴细胞。

1 回答562 围观

问免疫细胞流式分析，含量少的亚型怎么检测呢？

txs900416

看楼主使用的是什么活化模型，一般th1介导的模型就容易染出th1。此外，最好要用pma/ion/bfa联合处理细胞4-6h，才能让t细胞发挥出最大潜力，容易检测到th1/2/17/treg的分化

1 回答533 围观

问分选后细胞死亡率较高，计数远小于流式仪计数，有什么方法能保持细胞活性。

txs900416

一般分选液中要加bsa以维持细胞活性，此外操作尽量在冰上，分选时间缩短，都可以增加细胞的活性

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问酶联免疫吸附试验相关问题

dxy_gwrp7ndq

1、要保证加液量一致我们在使用时感觉滴瓶加液不如加样器好，滴瓶不易控制加液量不准，造成显色不统一，判断错误。2、显色液量不可过多加样的工作环境不能处于阳光直射的环境下，加显色系统后要避光反应，显色液量不能过多，以免显色过强。3、试剂的影响因数：应选用有国家批准文号，质量靠得住的产品，不能图便宜，忽视质量保证。试剂应妥善保存于4℃冰箱内，在使用时先平衡至室温，不同批号的试剂组分不宜交叉使用。试剂

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问冰冻切片做免疫荧光总是脱片怎么办？

txs900416

可以试一试把你切完的片子，晾干，用APES再浸泡一下子，再晾干，水洗三次，接着做，看一看能否不掉片子，此外也考虑一下OCT的原因，调整合适的温度

1 回答1023 围观

问chip-seq相关问题？

dxywode

你可以可以试试抗体可以多加点，加到4ug。阴性对照有条带是正常的，属于背景，关键是相对于目的抗体条带很弱才行。建议你做一个阳性chip实验证实你的体系没问题以及抗体没问题然后确定是否你的chip实验结果可信。希望能对你有帮助！

2 回答431 围观

问为什么ELISA实验中同一样本的复孔会相差很大？如何避免有这样大的差别？

师医生说

在酶联免疫吸附试验，同一样本的复测孔，如果是同一操作者，在相同的实验环境没有发生实验中的交叉污染时，是不会出现吸光度值相差很大的情况。在检测前，一定要对洗板机进行冲洗，另外要严格按照浓度配比进行洗液的配制，要用标准的微量加样器，手法标准的加样，要进行阴性对照，阳性对照和质控品的加样同一化加样。西板的过程也要注意加注洗液的高低一致，同时，拍板要干净，以防交叉污染

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问请问为什么同一条带，每次涂显影液会出来趋势不一样的结果？怎么样涂才能使结果更准确？

txs900416

一般考虑是显影液涂抹不均匀，曝光时间不一导致。建议将胶浸泡入显影液几十秒，再拿出来曝光

2 回答429 围观

问关于间接免疫荧光检测凝集素途径激活

dxywode

凝集素补体途径是补体激活的途径之一，由血浆中甘露聚糖结合凝集素（mannan-binding lectin,MBL）直接识别多种病原微生物表面的N-氨基半乳糖或甘露糖，进而依次活化MASP-1、MASP-2、C4、C2、C3，形成和经典途径相同的C3与C5转化酶，激活补体级联酶促反应的活化途径.MBL激活途径的主要激活物为表面含有甘露糖基、岩藻糖和N-氨基半乳糖的病原微生物.

1 回答506 围观

问免疫组化染色为什么有杂点？

府宅

组织中非抗原抗体反应出现的阳性染色称为非特异性背景染色，最常见的原因是蛋白吸附于高电荷的胶元和结缔组织成分上。最有效方法是在用第一抗体前加制备第二抗体动物之非免疫血清(1:5~1:20) 封闭组织上带电荷基团而除去与第一抗体非特异性结合。必要时可加入 2%~5% 牛血清蛋白，可进一步减少非特异性染色。作用时间为 10~20min。

3 回答532 围观

问即用型免疫组化怎么具体操作

泌尿神兽

1、脱蜡和水化：脱蜡前应将组织芯片在室温中放置 60 分钟或 60℃恒温箱中烘烤 20 分钟。 a 组织芯片置于二甲苯中浸泡 10 分钟,更换二甲苯后在浸泡 10 分钟 b 无水乙醇中浸泡五分钟 c 95%乙醇中浸泡五分钟 d 75%乙醇中浸泡五分钟 2、抗原修复：用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片： A 抗原热修复 a 高压热修复在沸水中加入 0.01m 枸橼酸钠缓冲溶液（ph6.0）.盖上

3 回答439 围观

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