实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问免疫荧光染色的单层细胞贴壁不牢

dxy_gwrp7ndq

1、包被时间不够，用明胶包被最好包被过夜(至少2h以上)。2、用于洗细胞的PBS温度太低。3、多聚甲醛是否恢复到常温。4、细胞密度太大

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问实验标本存在内源性干扰物怎样解决？

dxywode

（1）稀释标本：这在判断急性病原体感染的特异IgM抗体如抗HAVIgM，抗HBclgM， TORCH的IgM抗体检验等尤为有用。因为急性感染时，血循环中特异的IgM抗体滴度通常很高，而RF滴度通常相对要低得多。因此，在测定前对标本进行稀释，特异的IgM因高滴度存在仍可检出，而非特异的RF则会因为稀释变成非常低的滴度，从而对测定几乎不产生干扰。现在，有些特异IgM检测Elisa试剂盒不要求稀释标本，

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问用什么天平或仪器称量有磁性或带静电的物体？

dxywode

电子天平春夏季使用产生静电的解决方法静电一：空气干燥，室内湿度低于45% 解决方法:我们可以在室内或电子天平周围增加湿度，使之在70%左右为宜，就会解决此问题；静电二：称量时电子天平被称物体带静电解决方法:我们可以除去被称物的静电再进行称量；静电三：天平操作者衣服或使用的工具有静电解决方法:操作者使用天平前应先用手触摸墙壁等除去静电。

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问板上的标曲的OD值都应该是成一个梯度上升的，为什么不管做了多少个板，板上标曲的最后一个孔的OD值反而低了

dxy_gwrp7ndq

如果两个平行孔的OD值相差太大的话，有可能你酶标板没有包被好！其实也跟实验过程人工误差有关的，尽量减少操作所产生的误差。每次加完样品要适当的震荡一下，保证抗原与抗体反应充分。

2 回答526 围观

问某一个抗体多次调整条件还是跑不出来，除了抗体本身的问题还可能是因为什么呢？

dxy_gwrp7ndq

可能原因及解决策略：1. 上样量较少,建议上到20ul-50ul看看;2. 分离胶改为12-15%;3. 提高一抗和二抗的浓度,建议提高1倍;4. 如有可能改为ECL法显色;5. 尽量使用分子量Marker来标记目的条带的正确位置.

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问琼脂糖凝胶电泳实验，胶染料需要等凝胶温度降至50~60℃才能加吗？做回收胶的时候，缓冲液都需要是新加入的吗

府宅

胶染料需要等凝胶温度降至50~60℃才能加，一般我们去取胶染料的时候温度就差不多降下来了，不用刻意等，胶凝固了也会影响后面的操作。做回收胶的时候，缓冲液都需要是新加入，电泳槽里的缓冲液全部换掉，防止胶回收时污染。

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问染色质免疫共沉淀共沉淀实验中，验证十分沉淀目的DNA的特异性引物应该怎么设计？qpcr结果如何计算？

txs900416

引物设计原则还是参照pcr的引物设计原则，最好设计小片段的引物可以节省pcr的难度。模板应选用基因组上该基因的全系列，pcr的产物最好一边位于内含子区一边位于外显子区。chip的qpcr内参可选用一些现成的经过验证的ChIP-qPCR Control Primer Sets ，可以作为阴性对照引物或阳性对照引物直接使用，也省去各种检验的麻烦

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问免疫组化怎么估计抗体的使用量？

府宅

一个组织最多50ul抗体足够了。甚至更少20-30ul也可以，而且一抗还可以回收利用。

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问测免疫相关的酶活，怎么准备粗酶液。

txs900416

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问小鼠脂肪肝细胞的培养怎么做？

dxy_gwrp7ndq

处死小鼠,无菌分离肝脏,置D-Hanks液中,冲洗肝脏至灰白色,将肝脏剪成1mm×1mm×1mm的组织块,用D-Hanks液洗3次,去掉血细胞,37℃下用0.1%的胰蛋白酶消化10min,倒掉消化液后用D2Hanks液洗2次,培养液洗2次,将肝组织块贴壁于组织培养瓶中,每个培养瓶放组织块30～35块,加少许培养液,将培养瓶倒转置于培养箱中,在37℃、5%CO2条件下培养,3h后补充4ml培养液,并

2 回答554 围观

问可以通过什么方法检测抗体是否适用于染色质免疫共沉淀？

dxy_gwrp7ndq

目的蛋白抗体有效性也是染色质免疫沉淀实验的关键因素。要选择高质量,高亲和力和高效价的抗体来进行实验。先做Western Blot来检验在染色质免疫沉淀实验条件下抗体是否能够和目的蛋白的抗原决定簇结合而免疫沉淀。当抗体不能有效识别交联中的目的蛋白时，可更换其他不同靶向抗原决定簇的抗体或者降低甲醛固定交联时间。

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问跑出来的蛋白条带每一个呈现波浪锯齿形可能是哪些原因导致的呢？

dxy_gwrp7ndq

1、胶要凝得均匀，装胶时漏得厉害就不行2、电压不能太大3、样品中的盐离子浓度高，需脱盐。4、电泳缓冲液，胶缓冲液的PH值要对，最好是新配的

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问动物实验脾脏单个核细胞悬液能存多久在-80中

府宅

－80可保存半年，液氮中保存一年复苏

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问什么是核酸适配体？SELEX技术制备核酸适配体的原理是什么？

txs900416

核酸适配体（Aptamer）是一段寡核苷酸序列（DNA或RNA）。通常是利用体外筛选技术——指数富集的配体系统进化技术（Systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX），从核酸分子文库中得到的寡核苷酸片段。SELEX技术即指数富集的配体系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by

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问WB过程中怎么提高实验稳定性？

txs900416

主要是保证条件每次一致（例如转膜条件、液体离子强度、电压等），上样量严格相同，抗体不失效。另外每次都带阳性和阴性对照，可以防止实验操作引起的假阴性和假阳性。

1 回答419 围观

问小鼠效应T和记忆T cell

txs900416

效应T细胞和记忆T细胞一般采用cd62L和cd45ra区分，可加ccr7作为区别。通常将t细胞分为初始细胞记忆细胞(memory，tm)和效应细胞(teff)等亚群，其中tm又分为干细胞型(stem cell，tscm)、中央型(central，tcm)和效应型(effector，tem)等组份。这些cd8t细胞亚群及组份具有不同的表型标志，其中tscm和tcm同时表达趋化因子受体ccr7、黏附分

1 回答2090 围观

问western blot实验相关问题

dxy_gwrp7ndq

背景深、杂带多原因：1、一抗浓度高了；2、封闭时间短了；3、孵育完二抗之后洗脱时间短了；4、你的蛋白有没有其他亚型；5、你的一抗来源本来就有问题，买之前说明书上面杂带多么。

2 回答865 围观

问免疫组化染色怎样做效果更好？

LFF520宣城

为达到免疫组织化学技术的要求，组织固定越新鲜越好；组织脱水必须彻底干净；切片必须完整、均匀、平展、无邹折；切片的附贴必须牢固，必须使用合适的粘贴剂；切片必须烘烤附贴牢固，既要经得起抗原修复时高温的作用而不使轻易脱片，又不至于破坏抗原；切片脱蜡必须干净，否则将会影响免疫组化染色的最后结果。

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问减重法称量时，如何避免产生负值？

候季雨

避免天平周围环境气流波动，称量纸位置放准确。

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问为什么乙肝表面抗原胶体金法阴性但是酶联免疫吸附试验阳性？

Kimser

酶联免疫法和胶体金免疫层析法均为测定乙肝表面抗原的可靠方法,但胶体金免疫层析法的灵敏度有待提高。

4 回答833 围观

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