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实验问答

31,799,900 科研人在看

问HepG2 细胞是沾染细菌了吗？

dxy_gwrp7ndq

1,先用血平板做细胞培养排除细胞污染2,如果没有细菌生长那就是你的细胞在传代过程中没有及时更换培养基3,解决办法是:用胰酶消化细胞株,换瓶传代即可

5 回答685 围观

问ANP小分子蛋白20kD以下什么条件可以更好的曝出条带，经常出现白膜

府宅

很多常规的膜孔径为0.45um。你如果做小分子，17kd以下都跑掉了，那你应该试试0.2um孔径的膜。有一个小诀窍是转膜时叠两张膜一起转，如果小分子蛋白跑过了前面一张膜，那总还有可能被后面一张膜抓到。

6 回答613 围观

问有关WB实验转膜失败的问题？

天一湖医者

你的电转条件是湿转还是半干,如果是湿转,试试变换一下转膜条件,注意一下电转液中甲醇的量,因为它是用来洗脱蛋白上结合的SDS的,而SDS多了很可能就转不上膜.一般甲醇量在15%左右.另外PVDF膜要用甲醇浸透,并且平衡时间一定要够.

4 回答2211 围观

问为什么同一张膜电泳后裁开敷不同的抗体，曝光后的条带有的背景很高，有的背景很干净？

府宅

可能是你敷抗体的时候敷的不均匀。

6 回答353 围观

问凯式定氮法与双缩脲法测定时的异同。

dxy_gwrp7ndq

双缩脲法有重复性、线性关系好的优点，有灵敏度低、测定范围窄、样品需要量大等不足。凯氏定氮法进行蛋白质检测的，测定范围在0.1mgN～200mgN(毫克氮)（含氮量0.02% ～ 95%），需要的样品量也不像双缩脲法的那么大，只需要几克就行，因此，能够满足样品量不那么丰富的物质测定。

5 回答3293 围观

问样品脂肪含量太多，需要增添什么步骤？

dxy_gwrp7ndq

脂肪类较多的会采用正己烷萃取等办法去除。

3 回答534 围观

问加入乙醇洗涤能吹散沉淀吗？是吹散让它更纯还是会影响下一步操作？

天一湖医者

将一定量的乙醇加入之后，能够通过离心回收所有形成的核酸沉淀，并不能吹散沉淀。

3 回答858 围观

问提酵母菌和提细菌的RNA有什么区别吗？分别有什么注意事项？

bamboopiggy

酵母菌因为rna含量较多，dna含量少，所以一般用稀减法提取，细菌的一般和细胞一样，用酚氯仿抽提就可以了。

3 回答1553 围观

问一个基因有3个转录本，应该选取哪个反转录呢？

天一湖医者

1、带有MANE Select transcript标签，说明在ensemble和NCBI数据库中均认定该转录组是最主要，最保守和最高表达的。选择该转录本即可2、如无MANE标签，可看 APPRIS，它是相似的评价标准，P1代表最主要最相关的转录本。3、如无以上标签，可看注释，CCDS显示转录本的编码序列，与ensemble和NCBI数据库相匹配。

3 回答2234 围观

问检测RNA病毒，使用一步法还是两步法？

天一湖医者

一步法优点: 只需一步，反应发生在单管中，速度比两步法更快，而且需要较少的准备和操作时间。处理大量样品时易于操作，减少污染的机会。整个cDNA样品都被扩增，灵敏度更高。缺点: 同一样本只有有限数量的目的基因被扩增。另一个挑战是组分的兼容性，因为一步法需要转录和扩增之间的平衡。两步法优点: 可以分析同一样本的多个目标。逆转录步骤将样本中所有的RNA转换为cDNA，可以储存cDNA用于后续实验，检

6 回答1040 围观

问染色后可以用自动细胞计数器计数吗？

whilt-shirt

可以，染色只是区分活细胞和死细胞，不影响计数

4 回答600 围观

问cDNA法推断蛋白质一级结构时，引物有哪些设计要求，需要注意的问题？

府宅

1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。2.引物长度一般在15~30碱基之间。引物长度（primer length）常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq D

3 回答970 围观

问请问修饰后能用什么纯化方法可以把修饰的和未经修饰的分开?(当然修饰后还残留有聚乙二醇，这个小分子也要除掉)

崔果儿

大多用凝胶过滤，这也不错的做法，毕竟PEG是链状的分子，在柱子上和普通蛋白行为不一样，修饰度越高那么出峰也越后，因此蛋白选择sephadex G50试试，它的范围在1000-30000，应该是不错的选择。此外PEG是个疏水性的链，修饰后的蛋白疏水性增强，修饰度越高，疏水性越强，可以用这个原理分离。离子交换也可以选择，因为同样道理，修饰度越高，电荷被屏蔽也越多，电荷也越少，因此应该修饰度越高越先出。

2 回答928 围观

问超滤技术的关键是膜，膜都有哪些分类，各自的特点适合的实验是哪些？

天一湖医者

超滤膜的分类有很多:按照膜组件的不同分类:有管式超滤膜，板框式超滤膜，卷式超滤膜和中空纤维式超滤膜。按照按照压力驱动形式的不同:可以分为外压式和外压式。膜材料的不同分类:有有机超滤膜和无机超滤膜两种。

3 回答1008 围观

问想用荧光抗体对组织免疫染色，能染出梯度吗？如何对梯度分布的分子进行染色？

天一湖医者

可以的，通过调控镜片在染色液里上下运动的时间的方法进行。

2 回答436 围观

问请问在做bifc时，如何确定荧光发出的原因，是因为两个蛋白间相互作用，而不是因为两个蛋白浓度过高物理靠近发出的，如何界定这个浓度

天一湖医者

本实验需要设置阴性对照。即用pIB-YN155和pIB-nVC156 (VC156的N端带有atg，可以单独表VC156蛋白)。利用荧光显微镜观察时，需要调节荧光强度，在阴性对照组无荧光信号的情况下，观察实验组的荧光信号。

1 回答863 围观

问Co-IP实验成功的评判标准是什么？

府宅

当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。假如细胞内存在XY蛋白复合物，用X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也被沉淀下来。沉淀经多次洗涤后，重悬于电泳上样缓冲液，煮沸后离心收集上清，对上清进行免疫印迹（Westernblot，WB）检测Y蛋白的存在，如果Y出现，则说明蛋白X与蛋白Y存在相互作用，CO-IP实验成功。

3 回答706 围观

问小鼠附睾脂肪的组织染色需要特殊的固定液么？需要做冰切，HE染色。目前是直接放在4%PFA里。有什么固定液配方吗？

dxy_gwrp7ndq

4％多聚甲醛（ PFA ）的配制方法：1L: PFA 40g0.1M PB ( pH 7.4）先加入500∽800ml，加热至60℃，磁力搅拌使粉末完全溶解，再稀释至1L.* IL 0. 1M PB ( pH 7.4)： A : NaH2PO4 .2H2O 2.96362g B : Na2HPO4 .12H2O 28.99476g或Na2HPO4 11

3 回答2636 围观

问Co-IP中没有检测到与目的蛋白相互作用的蛋白或检测得到的信号太弱的原因有那些？

dxywode

3 回答580 围观

问请问牛乳酸度的测定这个实验怎么做？

府宅

实验步骤：1.配制0.1mol/L的NaOH标准溶液：用小烧杯在粗天平上称取固体氢氧化钠0.80克，加水100毫升，氢氧化钠全部溶解，将溶液倒入200ml的容量瓶中，用蒸馏水定容，充分摇匀。2.标定0.1mol/L的NaOH标准溶液：用减量法称取0.3-0.4克邻苯二甲酸氢钾，(精确到0.0001克)于250毫升锥形瓶中，称两份，加入100毫升水溶液，加三滴酚酞指示剂，用以上配好的氢氧化钠标准溶液

3 回答1951 围观

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