天一湖医者
使用较高浓度的分离胶进行电泳。
至少上样 20μg 总蛋白进行电泳。
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可能是是蛋白跑走了,跑胶时注意观察溴芬兰前沿,小分子不要跑太久,前沿接近胶底部就可以了。另外跑完胶染一下胶,看看你marker的11kd那条带在什么位置就可以知道你的目的蛋白有没有跑出去,差2kd一般两个位置会差不多;
要考虑你的目的蛋白在样品中的丰度,还有你处理样品的方法,最后考虑你的抗体的问题。
府宅
很多常规的膜孔径为0.45um。你如果做小分子,17kd以下都跑掉了,那你应该试试0.2um孔径的膜。有一个小诀窍是转膜时叠两张膜一起转,如果小分子蛋白跑过了前面一张膜,那总还有可能被后面一张膜抓到。
vae1476
降低转膜时间,提高分离胶浓度,都有帮助
bamboopiggy
1.用12%的胶跑,2.减少转膜时间。3看差不多分子量的marker还在不在
未来9
加显影液时条带拿出来就放一边让它反应一会,然后再放回机器里面,重新滴加显影液显影,效果就会好不少。
延长显影时间
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