实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问提出来的蛋白浓度太低，比如低于1ug/ul，有什么办法提高蛋白浓度吗?

天一湖医者

1、增加细胞量，比如两瓶细胞一起提蛋白。2、减少裂解液用量，比如200ul，浓度可能会加倍。3、延长裂解时间。4、改变方法：

5 回答3337 围观

问在SDS-PAGE胶跑完之后，为什么要再用考马斯亮蓝染色呢？我们看染色出来的胶是看条带整体颜色均一还是某些条带的粗细一致呢？

bamboopiggy

跑完page胶。如果没有转膜直接考染，就是看蛋白的表达，看条带的粗细，如果是转膜后考染的话，就是看蛋白是否转过去了

3 回答833 围观

问怎么保存可以延长一抗的使用时间？

dxywode

工作液根据需要稀释在5%奶粉里，再加入少量叠氮化钠（大约0.01% w/v），4度保存。Alisa_lin(站内联系TA)分装，-20度保存。不要反复冻融，没有用过粉末的二抗，按说明书呗石头2011(站内联系TA)液体的一抗没加甘油的话尽量不要放在负二十，因为用的时候反复冻融不好。粉末状的二抗负二十就行了sayaya(站内联系TA)液体的一抗直接放-80度贮藏，可保存5年以上；液体的一抗加50%甘

3 回答1153 围观

问WB显示培养基中的外分泌蛋白大于胞内的，这种结果正常吗，蛋白分泌到胞外大小会发生改变吗

bamboopiggy

蛋白分泌出胞外，一般会变小，因为要经过剪切。你是跑的native的胶还是denature的胶？会不会是你的分泌蛋白形成了高级结果？

3 回答465 围观

问蛋白质和脂质互作都有什么实验可以验证？

dxywode

如果你搜“PIP Strips”，就会发现，它是脂质与蛋白质相互作用的研究神器。Echelon专攻各种抗体、分析检测试剂盒、抑制剂等科研领域，尤其擅长以细胞信号、脂类代谢和标记物研究为主。为研究治疗诸如癌症、糖尿病、炎症、感染和心脑血管疾病专家提供了有效的科研工具。PIP条带是2 x 6 cm的疏水膜，其上有100 pmol的八种磷脂酰肌醇和七种其他重要的生物脂质。它们用于在简单的蛋白质-脂质叠加

2 回答1327 围观

问本人最近在做蛋白表达，蛋白表达在包涵体，用的是8M尿素进行溶解，但是溶解的总是不完全！这是为什么呢？

lyang556

可以尝一下以下方法：1. 提高pH值，比如pH10或以上；2. 添加高浓度还原剂如DTT等；3. 提高溶解的温度；4. 借助其他物理方法如超声波等。

3 回答1376 围观

问IHC-P,IHC-Fr和IHC-Fl切片固定条件（浓度，温度，时间等）和注意事项有哪些？

丁香粉猪猪

对组织浸蜡时，一般选用56℃~58℃熔点的石蜡，浸蜡温度最好不超过60℃，防止抗原的损失。

3 回答1553 围观

问ChIP实验中DNA的检测在什么情况下用PCR反应？什么情况下用测序？

dxywode

ChIP实验中，当检测已知蛋白结合的DNA序列的时候,可以使用PCR反应进行检测,因为你可以根据已知的DNA序列，取设计引物，然后进行扩增，看能不能将DNA扩增出来。扩增出来了，就证明你成功的使用抗体将目的基因富集下来。当你不知道结合蛋白所对应的DNA序列时，就要通过构建文库以后，进行测序，然后知道富集下来的DNA序列。

2 回答507 围观

问wb跑出来杂带很多应该怎么办？

dxywode

首先考虑减少二抗浓度。再就是减少曝光时间和显影时间。然后加强封闭（增加BSA浓度或改用牛奶，时间应该没必要延长了）。最后就是增强TBST洗脱增加洗脱次数和洗脱时间

3 回答2368 围观

问western目的条带上方还有一条稍细的条带，这种图片能否用于发文章？

丁香粉猪猪

抗体是不是回收重复利用的？重复利用的抗体效价会降低。2.样品是不是放的时间长了？蛋白有些降解，建议重新取样。若不是，可以用以前的样品做个阳性对照。看是否也是这样。3.杂一抗前用5%的脱脂奶粉封闭30min,可以降低背景和杂带。

4 回答269 围观

问ChIP实验中使用超声方法断裂染色质温度不易控制，可能会使蛋白变性，影响ChIP结果，有没有较好的优化方案？

dxywode

目前，市面上有很多打断仪器是可以持续控制温度在指定温度的。也就是说可以将温度控制在一个比较冷的环境中，这样可以减少你所说的蛋白质变性的可能。同时在打断时可以选择间断循环打断。就是可以减少打断的时间，增加打断的循环数，从而达到同样的打断效果和降低蛋白变性的可能性。

2 回答548 围观

问提取动物蛋白时加入5倍裂解液时，需要根据每样组织重量进行计算，还是可以用统一的量加？

晴天飞扬秀

根据重量加，组织重量和裂解液有个比例

4 回答381 围观

问qpcr无模板阴性对照出现 CT 值时，目的基因的 CT 值是否还能用？

dxywode

有可能的，因为CT值越小，基因表达就越高，所以还是有可能的。你要是觉得不放心可以做一个重复实验。

3 回答4428 围观

问RFect系列siRNA转染试剂细胞浓度要求是多少？

dxywode

我实验合siRNA使用说明:siRNA工作浓度般10-100nM我准备用50nM做转染相同孔板同量siRNA加转染试剂量相同所我觉存质粒DNA转染与转染试剂比例同影响转染效率问题siRNA能效干扰目蛋白表达加量越应该沉默效越.合siRNA比较贵加花费合siRNA体外瞬转染干扰效致能维持2-5左右。

3 回答557 围观

问酵母RNA提取实验的水解为什么用酸进行水解而不是用碱水解？

未来9

其实是碱水解，碱性水浴条件下RNA水解为寡聚核苷酸而DNA不水解，调pH为了沉淀DNA，调pH为酸性环境可以沉淀原有的和碱性条件下水解少量蛋白质产生的氨基酸

4 回答1223 围观

问Co-IP实验中如何去除重链、轻链的影响？

迟C迟

捕获抗体、检测抗体采用不同来源物种，使用针对检测抗体物种的特异性二抗；如果有可能，捕获抗体采用没有恒定区的纳米抗体。

3 回答1040 围观

问用Co-IP验证出两个蛋白互作，但是其他验证方式却不互作，是不是Co-IP不可靠？

迟C迟

COIP跟其他验证蛋白互作的实验比起来可信度还是很高的，投文章编辑也是认可度比较高的。如果实在对实验结果有所怀疑，建议重复。

3 回答319 围观

问为什么我的细胞提取液中没有目标蛋白？

邓豆豆逗

可能细胞表达量较少检测不到，建议换大皿培养，增加上样量，或者抗体浓度，还有可能确实没表达，重新诱导，同时用流式，elisa等同时检测

5 回答222 围观

问CO-IP实验如何检测低亲和力或者短暂作用的蛋白相互作用？

未来9

COIP的缺点之一就是可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用，应该做不到这个效果

3 回答332 围观

问请问离心柱型质粒小提试剂盒中的CP3吸附柱与离心柱型通用型DNA纯化回收试剂盒中的CB2吸附柱有什么不同吗

dxywode

离心柱型质粒小提试剂盒中的CP3吸附柱采用碱裂解法裂解细胞并提取质粒。其基于离心纯化柱能够在高盐状态下特异性地与溶液中的DNA 结合，而在低盐状态下进行DNA 洗脱的特性，实现质粒DNA 的快速纯化。使用本试剂盒提取的质粒DNA 可适用于各种后续试验操作，如：酶切，PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染部分细胞等。离心柱型通用型DNA纯化回收试剂盒中本试剂盒采用特殊的离心吸附材料，既能

2 回答1786 围观

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