聚丙烯胺分离胶相关问题请教

常用的是10%胶，分子量大小与胶浓度成反比，比如：15%的胶适合15-45kDa分子量，10%的胶适合18-70kDa分子量，5%的胶适合60-212kDa分子量

聚丙烯酰胺分离胶的配置方法及不同蛋白质浓度

聚丙烯酰胺凝胶浓度与蛋白质分离范围的关系：
聚丙烯酰胺凝胶浓度/% 蛋白质分离范围/kd
5 36—200
7.5 24—200
10 14—200
12.5 14—100
15 14—60
浓缩胶浓度低；分离胶浓度高于浓缩胶，一般不小于5%。

SDS-PAGE制胶操作流程

① 将玻璃板、样品梳、制胶架上的橡胶垫，用洗涤剂洗净，用ddH2O冲洗数次，再用乙醇擦拭，晾干；（清洗这一步其实非常重要对最终跑出来的条带是不是好看有很大的影响，不在乎条带是不是清洗好看的同学可以忽略此步骤）

② 将两块洗净的玻璃放入制胶架，一定要确保制胶架是平放在桌面上的，不然做出来的胶面会斜~~~；

③ 如何配置不同浓度的分离胶可以参考文章中的几个表格（常配胶的同学可以打印出来贴在实验室，就不用每次翻实验记录本了）。

④ 向玻璃板间灌制分离胶，立即覆一层双蒸水，大约30 min后胶即可聚合（封水一方面可以隔绝空气使胶加速凝固，另一方面可以使分离胶面水平，这一步至关重要！！！现在很多同学觉得麻烦都不会封水）；

⑤ 配置浓缩胶，配方参照文章中表格配制即可

⑥ 将上层双蒸水倒去，灌制浓缩胶，插入样品梳；

注意：在灌胶的每一步都要注意不要将气泡灌入胶板中，气泡会严重影响最终的实验结果

配置方法如上图，但是现在有些现成的kit，比自己配要方便一些。一般你想跑200以上的大蛋白，就用8%的胶，10几的小蛋白，就用15%的胶。位于二者之间的，用10%的就可以。一般用10%的多。