做WB的时候用商品化封闭液封闭结束是否需要用TBST洗脱后再加一抗孵育？用脱脂奶粉的时候是洗脱的，不知道这种成品是否仍需要？

每个商品化封闭液都有自己的Protocol，所以要按照说明书来做，其优点是封闭时间很快。

看你的一抗是用什么配的，如果是用封闭液配的就不用洗，否则还是洗洗的好，这样一抗里面不会带入封闭液的成分

一抗孵育完成后洗膜是为了洗掉未和膜结合的抗体，而不是磷酸盐。只有洗干净非特异性结合在膜上的一抗，加二抗时才不会因非特异结合而呈现很重的背景。至于是使用PBS(T)还是TBS(T)，这要具体看你的二抗种类。PBS不适合AP系列,PBS/TBSS适合AP和HRP体系。另外,做磷酸化蛋白的WB,PBS不合适.