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实验问答

31,802,844 科研人在看

问蛋白纯化时超声多久以及功率多大比较合适？

迟C迟

保持低温，400W ，工作5秒间隔5秒，大概重复10-20次吧。

3 回答4375 围观

问骨髓瘤做完骨髓穿刺术后，免疫电泳是否要做？做下来的结果是什么？

未来9

做了骨穿就可以，不一定要做免疫电泳。免疫固定电泳阳性不一定是骨髓瘤。血清免疫固定电泳是确定多发性骨髓瘤免疫分型的一种检查手段，它不仅可以显示血清中存在单克隆球蛋白，即M蛋白，还能明确该M蛋白的免疫类型，即IgM、Ig G、IgA、IgD或Ig E一中的任何一种，是多发性骨髓瘤的诊断标准之一。

3 回答860 围观

问microRNA的提取方法和RNA提取的方法相同么?

迟C迟

原理是一样的，因为提RNA一般指total RNA。但要注意的是很多抽总RNA的方法，包括一些试剂盒，最短组分都在100nt左右。这些方法不针对miRNA，里面的某些步骤会损失大量的miRNA，如果抽提miRNA是为了定量，那肯定是不行了，建议用试剂盒。

4 回答999 围观

问提取RNA，然后做需要什么试剂及试剂盒?

迟C迟

trizol法提取RNA，trizol买invitrogen公司的，逆转录试剂盒我们实验室用的东洋坊的，效果不错。

5 回答776 围观

问逆转录过程当中用的所有材料都是RNA级别的吗？EP管也要买特殊的吗？

迟C迟

是的，逆转录过程中的所有耗材都是经过处理的，最后逆转录成cDNA之后就可以用普通的EP管保存了。

6 回答448 围观

问反转录实验之前如何分析RNA样品符合实验要求？逆转录完成的DNA怎么知道满足做qPCR模板的要求？

迟C迟

1）检测RNA溶液的吸光度280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般的，我们只看OD260/OD280（Ratio，R）。1.82.0时，我们认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的，不过要注意，当你用Tris作为缓冲液检测吸光度时，R值可能会大于2（一般应该是<2.2的）。当R2.2时，说明RNA已经水解成单核酸

4 回答1297 围观

问hela细胞出现很多细小黑色颗粒

whilt-shirt

如果是用的高糖DMEM有可能会出现这种情况，可以更换1640试试

5 回答1489 围观

问我想问一下一抗以及二抗和抗原结合的原理，以及有没有什么办法提前检验抗体质量。

whilt-shirt

一抗是针对抗原的抗体，二抗是针对一抗的抗体。即抗体也可以充当抗原刺激机体产生抗体。也就是说，抗原进入机体刺激机体免疫系统产生免疫应答，由B细胞可以产生与相应抗原发生特异性结合的特殊蛋白质。一抗二抗都是一种可以特异结合别的物质的基团，而且一抗可以至少结合两种其他基团（底物和二抗）

3 回答3402 围观

问快切酶的酶切时间和什么有关，快切酶可以过夜酶切吗？

府宅

一般内切酶的活性是: 1U = 1小时切1ug DNA. 一般大家都用过量, 10U左右. 时间上我一般是: < 1ug, 1小时; 2-5ug, 2小时. 基本适用所有情况.

5 回答8382 围观

问蛋白标本保存时加入稳定剂如甘油、白蛋白，会影响之后跑蛋白的结果吗？哪种稳定剂最好？

迟C迟

稳定剂不影响跑蛋白结果，一般保存的时候会加入甘油。

6 回答2416 围观

问使用超声破碎还是钢珠会更适合？

dxy_gwrp7ndq

超声波破碎很强烈，适用于多数微生物的破碎，但有效能利用率低，破碎过程产生大量的热，且对冷却的要求相当苛刻，故不易放大，主要用于实验室规模的细胞破碎。

5 回答1455 围观

问WB扫出来的图第一次有气泡，再扫一遍会有影响吗？

Lv花开花落

没影响，静置一会儿能用。就是配胶的液体全部在四度存放，室温制胶时由于温差及凝胶聚合反应放热的关系，液体中微小的气泡在凝固的凝胶中也会放大成可见的较大的泡泡，这种情况在夏天室温较高时更容易出现。

4 回答1036 围观

问在点样的时候先加样品还是先加显色剂？需要考虑反应起始时间相同的问题吗？

dxy_gwrp7ndq

当然是要先稀释样品，再加显色剂，否则一会造成显色剂的稀释，有误差，

3 回答319 围观

问请问一下，SDS-PAGE蛋白质电泳，最近跑出来的胶都是这样的，以前不会，更换了配胶的母液，Buffer，还是一样，有哪位大神知

Lv花开花落

胶的凝结不好，例如有花纹特别是浓度高的胶在冬天温度较低的情况下，在分离胶的下部有波浪样的花纹，凝胶不均匀。解决方法：加大TEMED和过硫酸胺的量，使其凝结速度加快。同时洗干净玻璃板，防止有残留的胶干结在玻璃板上。胶不凝，解决方法：温度较低时加大TEMED和过硫酸胺的量，过硫酸胺必须新鲜配制。如若还是不行重新配制一下缓冲溶液。胶易碎，例如浓度较高的胶在染色和脱色过程以及扫描过程中破裂。解决方法：首先

4 回答2243 围观

问一张膜曝光之后，用那种膜洗脱液效果比较好，洗多久合适？

府宅

TBS/T洗膜3次,每次5分钟。用滤纸去尽残液

5 回答567 围观

问为什么疏水性差异的两种蛋白在反相层析和疏水层析上，出峰位置相反呀？

Lv花开花落

1、一种是疏水性太强，这样的蛋白质有非常强的疏水相互作用，往往容易导致结合上疏水层析后难以被洗脱下来。需要极其剧烈的洗脱条件，可是剧烈的条件由容易造成蛋白变性。所以不适合采用疏水层析。2、另一种就是疏水性太弱，这样的蛋白质亲水性强，疏水性弱，往往加入一点盐后就容易发生盐析作用。难以稳定的存在于高盐的流动相中，也就不适合采用疏水层析。

1 回答808 围观

问WB各组间内参的条带差异较大，可能的原因是什么，如何避免。

府宅

WB最关键的还是转膜和敷抗体步骤，可能是您敷抗体的时候敷的不均匀。建议您在仔细的做几遍也可能是在显影液环节，简单来说就是您的膜没有淋干净，上面残留参差不齐的 T/TBS，T/TBS 能稀释显影液，目的条带本来表达量就少，某一个点残留的 T/TBS 稍微多一点就可能导致显影效果下降，所以建议在显影液反应前，尽量将膜上的洗膜液淋掉

5 回答830 围观

问对于文献中特异性抗体，用到的并不多，都是买文献用到的那个公司吗？

dxy_gwrp7ndq

6 回答453 围观

问如何更好地保存蛋白？

dxy_gwrp7ndq

纯化后的蛋白测浓度后，加入50%甘油，确认混匀后分装，液氮速冻，放入-20度或-80度保存，尤其适用于酶类。如即提即用的话，可将浓缩蛋白质储存在单一溶液（如PBS），置于聚丙烯管或干净的玻璃容器中，放在4°C冰箱保存。

5 回答6787 围观

问怎么根据氨基酸序列来推测它折叠后的结构域。

dxy_gwrp7ndq

3D- pssm、Swiss － model （同源建模）可以预测

5 回答950 围观

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