• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        如何避免荧光定量pcr检测技术的实验误差?

        相关实验:组织和细胞内miRNA丰度的检测实验

        user-title

        dxy_y1fhwtnq

        wx-share
        分享

        3 个回答

        user-title

        迟C迟

        有帮助

        可以从以下几个方面考虑:

        1、样品的处理及选取

        处理样品时,必须确保样品都得到了充分的处理。选取实验样品时,要保证选取的组织尽可能的纯,不要污染其他组织,样品选好后,即可放入液氮或超低温冰箱保存。

        2、核酸提取

        加入液氮研磨要彻底,蛋白、多糖、多酚类物质要去除干净,确保得到高质量的核酸,分光光度计检测核酸质量,RNA OD260/280=2.0左右,DNA OD260/280=1.8左右,最好再做电泳检测;同一样品要提取2到3个RNA,所剩余的样品不要丢弃,继续低温保存。

        3、得到的RNA立即反转录为cDNA,RNA样品最好不要存放。4、对于精度要求较高的定量PCR,最好先在样品的所有组织类型内做内参基因的稳定性分析,找到表达恒定基因作为内参。

        5、做定量PCR时,先把除模板外的所有试剂预混,然后分装到PCR管中,分装时尽量采用排枪,加样时尽量采用排枪。

        6、体系中最好参入ROX参比荧光,消除光程差和加样的偏差。

        7、重复操作

        让重复操作最大的修正偏差。最有意义的重复是提取样品RNA时就重复,同一个样品,分别提取3份RNA,3份RNA都做反转录,所得的3份cDNA都做定量PCR检测,这样的重复之所以最有意义是因为我们把RNA提取、反转录、上机检测三步做了重复,这样得出的平均值要比只在上机检测时对同一cDNA样品做三个重复要有意义的多。

        user-title

        vae1476

        有帮助

        复孔间差距要降低,可以注意统一配制试剂,然后加到每一个孔里面,要稍微多配一点,每一行加好,稍微混匀

        user-title

        府宅

        有帮助

        1)用进口的枪头,以免挂壁的残液太多。

        2)增大模版的上样体积(将模版稀释),每个反应中模版的体积不要小于5ul

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序