实验问答

21,783,935 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问慢病毒包装一个细胞可以进几个载体？细胞和包装系统的量怎么确定？一个细胞可以包装几个病毒，包装病毒后细胞会裂解吗？

bamboopiggy

这个要看你的包装系统是几质粒的，例如2代包装体系就是3质粒的，3代是四质粒的。然后这些质粒都要进入细胞才能完成包装。至于包几个病毒，要看你的操作水平了，水平高，病毒滴度就大。包装病毒后，细胞不能裂解，裂解了，就死了，没法产毒。

2 回答840 围观

问这是形成引物二聚体了吗？但是为什么产物也很多

bamboopiggy

看位置是引物二聚体，只要有你的目的条带，你不要管这个二聚体就好。至于产物也多的原因，是因为你pcr反应的底物和酶，包括引物本来就是过量的，所以够合成你的目的条带。

3 回答449 围观

问代谢组学的数据怎么分析

天一湖医者

代谢组学分析数据用于统计分析时，数据集通常为一个N × K的矩阵（X矩阵），N表示N个样本数，每一行代表一个样品， K表示K个变量，每一列代表一个变量，在代谢组学中变量通常是指代谢物含量。最常用的分析方法如图

4 回答918 围观

问蛋白纯化时超声多久以及功率多大比较合适？

迟C迟

保持低温，400W ，工作5秒间隔5秒，大概重复10-20次吧。

3 回答3234 围观

问WB条带扭曲可能得原因有哪些

天一湖医者

电泳电流不均一，建议换电泳槽，或者不使用两边的孔。

4 回答2694 围观

问WB中目的条带拖尾并且出现非目的条带

bamboopiggy

目的条带拖尾是因为蛋白上样浓度太高了，当然也可能是蛋白降解了。出现非目的条带，感觉就是蛋白降解了。在处理蛋白过程中，要注意低温。

4 回答346 围观

问膜蛋白怎么变性比较好？

bamboopiggy

蛋白一般还是要通过95-100度，煮一下来变性打开的，如果膜蛋白比较脆弱，考虑lysis里加蛋白酶抑制剂，并且将煮样时间缩短为5min

5 回答2161 围观

问IP用多克隆抗体结果能行吗？

vae1476

可以用的，而且有些情况下，由于能识别多个表位，多克隆抗体可在IP/ChIP中得到更好的结果。

5 回答503 围观

问骨髓瘤做完骨髓穿刺术后，免疫电泳是否要做？做下来的结果是什么？

未来9

做了骨穿就可以，不一定要做免疫电泳。免疫固定电泳阳性不一定是骨髓瘤。血清免疫固定电泳是确定多发性骨髓瘤免疫分型的一种检查手段，它不仅可以显示血清中存在单克隆球蛋白，即M蛋白，还能明确该M蛋白的免疫类型，即IgM、Ig G、IgA、IgD或Ig E一中的任何一种，是多发性骨髓瘤的诊断标准之一。

3 回答590 围观

问microRNA的提取方法和RNA提取的方法相同么?

迟C迟

原理是一样的，因为提RNA一般指total RNA。但要注意的是很多抽总RNA的方法，包括一些试剂盒，最短组分都在100nt左右。这些方法不针对miRNA，里面的某些步骤会损失大量的miRNA，如果抽提miRNA是为了定量，那肯定是不行了，建议用试剂盒。

4 回答695 围观

问提取RNA，然后做需要什么试剂及试剂盒?

迟C迟

trizol法提取RNA，trizol买invitrogen公司的，逆转录试剂盒我们实验室用的东洋坊的，效果不错。

5 回答498 围观

问逆转录过程当中用的所有材料都是RNA级别的吗？EP管也要买特殊的吗？

迟C迟

是的，逆转录过程中的所有耗材都是经过处理的，最后逆转录成cDNA之后就可以用普通的EP管保存了。

6 回答238 围观

问反转录实验之前如何分析RNA样品符合实验要求？逆转录完成的DNA怎么知道满足做qPCR模板的要求？

迟C迟

1）检测RNA溶液的吸光度280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般的，我们只看OD260/OD280（Ratio，R）。1.82.0时，我们认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的，不过要注意，当你用Tris作为缓冲液检测吸光度时，R值可能会大于2（一般应该是<2.2的）。当R2.2时，说明RNA已经水解成单核酸

4 回答623 围观

问请问WB跑出来的条带跟目的条带大小有偏移是为什么？

vae1476

1. 确定蛋白是内源的还是外源的，如果是外源蛋白是不是全长序列；2. SWISSPROT 数据库查询该蛋白是否有其他 isoform；3. SWISSPROT 和文献查询蛋白质是否有剪切活化，剪切活化造成蛋白变小；4. 确定蛋白质是否是二聚体或多聚体。5. NCBI 和 SWISSPROT 查询蛋白质表达后是否有修饰，如有修饰会导致蛋白质增大；

7 回答1413 围观

问hela细胞出现很多细小黑色颗粒

whilt-shirt

如果是用的高糖DMEM有可能会出现这种情况，可以更换1640试试

5 回答1061 围观

问WB曝光选择电子照胶仪好还是胶片曝光好？利弊分析？

迟C迟

个人认为用胶片还是比较稳定的，而且灵敏度要比电子显影的方法高一些，对于一些比较弱的带来说比较适合，还有就是感觉背景好一些。

5 回答1841 围观

问wb和免疫组化可以用同一种抗体吗，抗体怎样保存最好。

迟C迟

可以到卖抗体的公司网站上查一下适用实验。抗体可以保存在50％的甘油存放于-20℃。也可以将其保存在饱和硫酸铵于4℃或-20℃保存。

6 回答856 围观

问我想问一下一抗以及二抗和抗原结合的原理，以及有没有什么办法提前检验抗体质量。

whilt-shirt

一抗是针对抗原的抗体，二抗是针对一抗的抗体。即抗体也可以充当抗原刺激机体产生抗体。也就是说，抗原进入机体刺激机体免疫系统产生免疫应答，由B细胞可以产生与相应抗原发生特异性结合的特殊蛋白质。一抗二抗都是一种可以特异结合别的物质的基团，而且一抗可以至少结合两种其他基团（底物和二抗）

3 回答3070 围观

问蛋白标本保存时加入稳定剂如甘油、白蛋白，会影响之后跑蛋白的结果吗？哪种稳定剂最好？

迟C迟

稳定剂不影响跑蛋白结果，一般保存的时候会加入甘油。

6 回答1169 围观

问生物成像中细胞成像的应用

vae1476

可以通过心肌细胞激光共聚焦扫描显微图像进行观察

2 回答570 围观

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

实验小助手

扫码领资料

反馈

TOP

打开小程序