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问
抗体纯化的方法怎么选择
府宅
固定化金属螯合亲和层析法:配体稳定性高,吸附量大,洗脱条件温和,但同样也更加复杂,因为需要额外的步骤固定金属离子。离子交换层析法:离子交换层析是一种较为常见并被广泛使用的抗体纯化方法。尺寸排阻色谱法:可用于DNA,蛋白质的纯化,缓冲液更改,脱盐等。疏水作用层析法:与蛋白质的作用比较温和,所以能够更好地保持生物大分子的天然结构和生物活性,同时疏水作用也非常擅长从大体积样品中提取低含量的目标蛋白。
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问
核酸斑点杂交,预杂交液和杂交液的制备
bamboopiggy
预杂交液和杂交液在灭过菌的试管里制备就可以。杂交液和预杂交液的区别就是一个加的探针,一个加的鲑鱼精DNA来封闭非特异性的吸附点。预杂交液实际上就是不含探针的杂交液,。用于制备杂交液的预杂交液需要加鲑鱼精DNA,也可以用牛血清。杂交液每100平方厘米 60ul够了,因为预杂交液不可能100%的倒出来,还是有点的。
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问
测定酵母中的海藻糖含量,菌体已经收好存于-80摄氏度,拿出来之后可以先解冻了在用细胞破碎以破碎细胞吗?
Topmicro
可以先解冻再破碎,酵母有细胞壁比较皮实,而且解冻之后破碎也更方便。
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问
老板叫测酵母的海藻糖含量,试剂盒里说明细胞/细菌使用超声破碎法破裂细胞,但是实验室没有超生破碎仪,该用什么方法破碎酵母呢?
府宅
使用0.22um玻璃珠震荡破碎酵母,这种破碎效果蛮好的,还经济
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问
WB实验抽提蛋白是用的loading buffer浓度?
whilt-shirt
一般情况都是用5x的,毕竟加到蛋白裂解液里面会稀释loding
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问
为什么药物对肿瘤细胞突然没效?
府宅
会不会与每个孔中细胞的数目有关系?如果你每个孔中细胞数目与文献采用的细胞数不一样,也会导致抑制率不同。还有细胞还受培养环境的影响,温度溶剂都与文献报道的一致吗?并且实验的干扰因素也很多,建议每一批次做三次重复实验。多设置几个药物梯度(一般都是做九个梯度);24h和48h接种不同的细胞密度。
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问
目的蛋白15KD左右,一直没跑出来,内参β-actin一直都有,转膜试过衡流220 40min,也试过20V 15min
小熊纯一郎
百分之15的胶,不用跑到底,15的条带位置分开就行,转膜用0.22微米的膜,转40分钟左右,跑胶时可以把那个机器泡冰水里,降低电泳液温度,转膜时转膜液预冷。增加蛋白上样量,增加一抗浓度,或者换别的品牌的一抗。我觉得主要问题在于一抗,我们实验室0.45的膜,0.22的膜,pvdf膜,nc膜,还有转膜时间少到40min或者多到2小时,是都可以将小分子跑出来的。我的第一建议是换一抗,或者加一抗浓度。
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问
covid-19男女差异
天一湖医者
男性血浆中的ACE2浓度要高于女性。此外,该研究还发现,心力衰竭患者服用RAAS抑制剂,例如血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂或血管紧张素受体阻滞剂(ARBs),他们的血液中没有更高浓度的ACE2。
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问
请问电泳时为什么会跑成这样,谢谢
飞天幻雪
胶配的有问题。正常情况下不会出现弥散这么严重的,如果还是这样建议所有试剂都用新的
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问
分离支原体应如何选择培养基?
未来9
支原体常用培养基为PPLO,很多公司都有出售.但血清(常用马血清或猪血清)和抗生素(醋酸跎)需要自己添加.
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问
我的wb内参条带两边是翘起来的,请问怎么回事呢?
天一湖医者
电泳条带或整体出现 “︶ ”形状,可能原因主要包括两方面。一是电泳速度过快,可通过减少电压等减慢电泳速度。二是电泳温度过高,使得胶变形,可在冷室或者冰浴中进行电泳或者改变电泳pH。
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问
做wb实验时怎么保证蛋白不被降解
未来9
1、样本制备过程中尽量保持低温,避免蛋白变性、降解;2、加入PMSF,抑制蛋白酶活性;
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问
做wb半定量为什么内参总是调不一致
未来9
一:如果单独上样可以出现,可以排除蛋白本身的问题,但混合一起加时却跑的不齐,最大的可能就是胶的问题,胶配的不均匀导致蛋白跑的不在同一水平。二:就是抗体孵育问题,不知你是用孵育盒,还是用封膜孵育,一定要保证膜与抗体充分接触,保证孵育效果。三是显影剂是预混还是混合好的,注意混合比例
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问
we实验的时候,内参没出来,但是其他条带都很正常,而且符合结果,这样的结果是什么原因?可以用么?
dxy_91s7x0o6
内参一抗失效或二抗与内参一抗不匹配
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问
什么情况下蛋白需要进行超声
未来9
看你的样品种类, 细胞或细菌需要超声处理裂解蛋白
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问
同样的样品同样的上样量上了八个,最后条带从左到右颜色大小逐渐降低,不是一样的,为什么
whilt-shirt
有可能是转膜时没夹紧,或者是不是一抗二抗敷育时没放平
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问
请问WB电泳时跑成这样是为什么
天一湖医者
可能是蛋白量太大,或一抗浓度和时间太长,可根据情况调整蛋白量,同时一抗浓度和时间也可以缩短
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问
做WB用预置胶跑maker条带很挤
天一湖医者
电压太小了,或者可以用较小浓度的胶试试
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问
wb实验,条带和背景颜色都很深,虽然能区分,但是样子不好看,是什么原因?
dxy_91s7x0o6
可能原因:一抗稀释度不合适,一抗或二抗封闭温度高,洗膜不充分
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问
实时荧光定量 PCR 实验重复不出来是怎么个情况?
hml04010418
没有具体信息。每次条件的一致包括样本处理的一致。
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