为什么药物对肿瘤细胞突然没效？

会不会与每个孔中细胞的数目有关系？如果你每个孔中细胞数目与文献采用的细胞数不一样，也会导致抑制率不同。还有细胞还受培养环境的影响，温度溶剂都与文献报道的一致吗？并且实验的干扰因素也很多，建议每一批次做三次重复实验。

多设置几个药物梯度（一般都是做九个梯度）；24h和48h接种不同的细胞密度。

镜下观察细胞状态，加药的和对照组之间死的细胞多不多？第一点：你手里的细胞以及状态都跟文献报导不一样的，你要摸一下药物的作用浓度；第二点细胞密度和作用时间也是你需要观察的，一般都是要做多个时间点的，药物还有半衰期等多种因素都是需要你去实践的。

查一下你药物的有效期，可能就是药物过期，坏掉了

可能癌细胞发生突变，使癌细胞适应抗癌药物

第一是由于肿瘤细胞与药物屡次接触后，对药物的敏感性下降甚至消失，致使药物对肿瘤细胞的疗效降低或无效。另一个原因就是癌细胞虽是由干细胞分化，增殖，但在后期再生长过程中会形成很多的亚克隆，每个克隆癌细胞团在生长转移和对药物敏感性都是不同的。对化疗药敏感的癌细胞被杀灭，活下来的有药物抗性的癌细胞不断复制，就占领了主要战场，原来的药发挥不了应有的作用了。