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问
关于核酸斑点显色,我的膜有点小就只有2*5
bamboopiggy
显色反应可以放皿里,也可以放杂交袋里。膜小,可以放小点的盒里,如果想扩大体积,也可以的。
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问
杂交显色的问题,我还有好多问题🙊
bamboopiggy
显色反应可以放皿里,也可以放杂交袋里。膜小,可以放小点的盒里,如果想扩大体积,也可以的。
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问
如果做污染物对肠分泌GLP-1的影响 选择STC-1细胞还是NCI-H716细胞
bamboopiggy
你要有污染物的提取物,这两个细胞都可以,只是一个是人源的,一个是鼠源的,注意抗体的用法。
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问
如何筛选吸附和钝化重金属菌株?
Topmicro
方法一:菌株活化后接种最适培养基,并加入一定浓度的重金属离子,每隔一段时间取发酵液离心,测定上清液中重金属离子浓度;方法二:采用肠道模拟系统加入重金属离子与菌株共培养,取上清液测定重金属离子浓度;方法三:构建重金属暴露小鼠模型,饲喂菌粉,测定血液及各组织器官中重金属离子浓度,与对照组相比观察其是否降低。
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问
WB曝光后,膜一片白一片黑而且条带很浅是怎么回事?
bamboopiggy
估计是你的抗体不特异,所以条带浅,然后与黑的地方有非特异性结合。你可以试试增加抗体浓度,看条带会不会黑点。至于非特异性结合,你在确定条带可以以后,提高点洗膜液中tween的浓度就好
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问
蟾蜍腓肠肌单收缩的缩短期是多少毫秒?绝对不应期是多少毫秒,两者之间的区别是什么?
bamboopiggy
你把概念弄混了,肌肉收缩是有单收缩和不完全强直收缩和完全强直收缩。单收缩的缩短时间取决于刺激的强度和频率。另外,绝对不应期是心肌独有的特性,在绝对不应期内,给予任何刺激都不会产生动作电位,从而不会引起肌肉收缩。
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问
STC-1细胞和NCI-H716细胞哪种更好养活
迟C迟
个人觉得STC-1细胞更好养活,NCI-H716细胞株是悬浮细胞株,少部分会贴壁,贴壁后生长缓慢。
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问
抗体纯化的方法怎么选择
府宅
固定化金属螯合亲和层析法:配体稳定性高,吸附量大,洗脱条件温和,但同样也更加复杂,因为需要额外的步骤固定金属离子。离子交换层析法:离子交换层析是一种较为常见并被广泛使用的抗体纯化方法。尺寸排阻色谱法:可用于DNA,蛋白质的纯化,缓冲液更改,脱盐等。疏水作用层析法:与蛋白质的作用比较温和,所以能够更好地保持生物大分子的天然结构和生物活性,同时疏水作用也非常擅长从大体积样品中提取低含量的目标蛋白。
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问
预杂交液的洗膜 65摄氏度洗膜是怎么操作呢
bamboopiggy
你问的是在65度,怎么洗膜吧?你可以把预杂交液预热到65度,然后放入膜,想65度洗,可以讲带温度的摇床调到65度,也可以把普通摇床,塞到65度的孵箱里,办法总比困难多
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问
核酸斑点杂交,预杂交液和杂交液的制备
bamboopiggy
预杂交液和杂交液在灭过菌的试管里制备就可以。杂交液和预杂交液的区别就是一个加的探针,一个加的鲑鱼精DNA来封闭非特异性的吸附点。预杂交液实际上就是不含探针的杂交液,。用于制备杂交液的预杂交液需要加鲑鱼精DNA,也可以用牛血清。杂交液每100平方厘米 60ul够了,因为预杂交液不可能100%的倒出来,还是有点的。
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问
革兰氏染色,细胞能染上色吗
Topmicro
革兰氏染色是通过细菌的细胞壁薄厚不同来实现的,细胞没有细胞壁所以不会呈现紫色。
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问
测定酵母中的海藻糖含量,菌体已经收好存于-80摄氏度,拿出来之后可以先解冻了在用细胞破碎以破碎细胞吗?
Topmicro
可以先解冻再破碎,酵母有细胞壁比较皮实,而且解冻之后破碎也更方便。
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问
WB实验抽提蛋白是用的loading buffer浓度?
whilt-shirt
一般情况都是用5x的,毕竟加到蛋白裂解液里面会稀释loding
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问
跑胶的时候选择恒压还是恒流?
未来9
跑胶时要求是恒压,转膜时才是恒流
5 回答
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问
在ncbi上搜索基因序列,为什么给出的氨基酸注释与密码子表不一致呢 例如∶GAA ncbi上给出的是F,对应密码子表GAA应为E
bamboopiggy
你给的那个图太小了,我看不清楚,但是你考虑没有考虑过GAA的相对应的反向链是UUC呢?uuc正好就是F。
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问
石蜡切片在染色过程中出现脱片现象怎么避免?
努力搬砖建设梦想
前面说的都很全面,我补充一点,是我老师说过的,就是在固定包埋的时候要做好。有时候固定没做好,后面切片染色的时候就很容易脱片。用防脱片都不太行
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问
we实验的时候,内参没出来,但是其他条带都很正常,而且符合结果,这样的结果是什么原因?可以用么?
dxy_91s7x0o6
内参一抗失效或二抗与内参一抗不匹配
4 回答
648 围观
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问
同样的样品同样的上样量上了八个,最后条带从左到右颜色大小逐渐降低,不是一样的,为什么
whilt-shirt
有可能是转膜时没夹紧,或者是不是一抗二抗敷育时没放平
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524 围观
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问
为什么我做出来的是这样呢
喵喵喵柏
除了其他人说的之外,还需要注意这个背景不是很干净,建议优化一下封闭条件,比如室温下延长时间,或者使用牛奶封闭
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问
实时荧光定量 PCR 实验重复不出来是怎么个情况?
hml04010418
没有具体信息。每次条件的一致包括样本处理的一致。
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