同样的样品同样的上样量上了八个，最后条带从左到右颜色大小逐渐降低，不是一样的，为什么

有可能是转膜时没夹紧，或者是不是一抗二抗敷育时没放平

显影液没敷匀，再重新敷显影液就好了。

最大可能是胶配置不均一问题或者电泳液是不是过期了。可以先排除一下胶和电泳液的可能。也有可能是蛋白质提取出了问题，可以看一下marker的条带是不是也是深浅不一的。或者是曝光液的问题，不过一般可能性较小。

很可能是敷抗体的时候敷的不均匀，可以重复实验

有可能是样品没有彻底混匀，每次上样前都建议彻底震荡混匀后再离心上样，还有你电转仪器出了问题，电压不均衡

你跑胶的时候条带没有不一样吧，出现颜色不一样，应该是转膜以后，才出现的吧？可能是你转膜夹子松了，或者是抗体孵育的时候不匀。