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        为什么细胞解冻后缺少活力,活细胞占比较低?

        相关实验:冻存细胞的复苏

        user-title

        大彬大彬

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        4 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        慢冻速溶,液氮保存,如果达不到前面的条件,细胞存活率就会降低

        user-title

        Topmicro

        有帮助

        可能的原因有1.冻存方法不合适,包括冻存条件和冻存液;2.冻存后长时间未复苏;3.解冻方法不合适。4.细胞本身原因。

        user-title

        未来9

        有帮助

        这种现象可能主要由以下几种原因所导致:培养物冻存液不行,冻存方法不当 和解冻没弄好

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        这种现象可能主要由以下几种原因所导致:

        1.培养物冻存液等质量欠缺。

        解决方案:

        a.确保用来制备储存物(冻存液)的起始培养物需要保证其健康、无微生物污染、处于生长对数期后期状态。

        b.收获细胞时需要小心翼翼,避免细胞损伤。

        2.储存物冻存方法不当

        解决方案:

        a.在液氮冷冻细胞时,确保细胞、培养基和其他试剂的浓度,以及冻存实验步骤依照供应商的建议。一般来说,冻存应该缓慢,大约1-3° C/min以减少冰晶形成。

        b.使用电子可编程或机械冷冻装置以确保一致的、适当速率的冷冻。

        c.选择最合适的细胞冷冻保护剂。如果使用甘油,不要将其存储在光照下,因为曝光会使甘油转化为有对细胞毒性的丙烯醛。

        3.储存物保存不当

        解决方案:

        a.储存物应时刻保持在-130℃,理想情况是置于液氮中,以确保较大的细胞活性。

        b.如果将细胞直接浸入液氮中,容易造成液氮泄露到冻存管内,解冻时会有冻存管爆炸的风险。所以一般储存在液氮上方的气相环境中。

        4.细胞解冻方法不当

        解决方案:

        a.一般来说,细胞应该快速解冻、使用预热的培养基、尽快移除含有冷冻保护剂的培养基防止细胞活力下降。

        b.确保小心操作细胞。不要涡旋或高速离心,因为低温保存后的特别容易受到损伤。

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