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        培养的细胞为什么总是一言不合就抱团,吹打之后也还是会这样?有什么很好的办法解决这一问题吗

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        dxy_gwrp7ndq

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        5 个回答

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        丁香清香

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        引起细胞抱团的根本原因是细胞状态变差,且在吹打细胞的时候,那些状态好的细胞也会因为多次吹打而受损,所以我们认为最根本的解决方法是摸透培养的细胞的生长习性,让细胞保持较好的生长状态。

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        bamboopiggy

        有帮助

        hepG2细胞就是爱抱团,你可以适当延长胰酶消化时间,在皿外混匀,直接加入皿里,别想在皿里晃开

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        天一湖医者

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        细胞为啥总是喜欢抱团?

        1,细胞死亡释放出DNA,缠绕其他细胞,形成黏性的细胞团(消化的过程可能过于粗暴,吹打太用力,消化太久,消化液太强或有毒性等)。

        2,细胞离心速度过大或时间太长。

        3,消化不完全的时候,细胞和细胞之间的连接没有分开;消化过度的时候,圆形的细胞容易聚堆,再分开很困难!

        4,状态不好、老化的细胞,也可能会出现抱团生长的情况(比如换液不及时、长的太满才传代、污染等造成的细胞状态)。

        5,传代后细胞铺板不均匀。

        如何避免细胞抱团?

        1,用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞。

        2,对于贴壁非常牢固的细胞(如MDCK),为了细胞更好的状态,更漂亮的样子,建议分多批多次消化,这样才能最大限度地将胰酶对细胞的损伤降到最低,保证细胞的状态能够最优。

        3,细胞生长密度不要太高,70%-80%就好(细胞刚刚基本成单层细胞,没有出现成层生长),这样细胞抱团的几率就大大减少了。如果细胞已经长成集落,可先将细胞低密度传代,第二天再消化传代,这样连续传三次,细胞抱团的就越来越小,这样几代过后,再按照常规消化方法和时间能将细胞逐渐传成单个的。

        4,消化过程中最好不要使劲摇动培养瓶,这样细胞特别容易成屑样脱落。细胞一旦脱落入悬液里就很难再将他吹打成单个(因为细胞没有受力点了,所以细胞很难分散开)。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开,严格控制好消化程度。

        细胞抱团了,要如何处理?

        1,如果细胞抱团不影响生长就没问题,只是计数的时候要麻烦点了。在消化的时候在细胞由多角形变成圆型之前,就用手轻磕培养瓶的侧壁,使细胞从壁上脱落,就可以了!——最好不要吹打,对细胞性状和生长都不好。

        2,如果感觉有死细胞的DNA,在细胞悬液中加入几滴无菌的DNAse(1mg/ml溶于水)将DNA链打断。轻柔地吹打细胞,防止对细胞膜造成物理损伤。

        3,如果细胞抱团是肉眼可见的,那就让细胞静置半分钟左右,然后吸取上半部分没有抱团的细胞悬液来传代。如果细胞抱团肉眼不可见,那可能没有特别好的分离方法,只能等细胞状态改善后将这部分细胞慢慢排除出去。

        user-title

        未来9

        有帮助

        细胞抱团了,要如何处理?

        1,如果细胞抱团不影响生长就没问题,只是计数的时候要麻烦点了。在消化的时候在细胞由多角形变成圆型之前,就用手轻磕培养瓶的侧壁,使细胞从壁上脱落,就可以了!——最好不要吹打,对细胞性状和生长都不好。

        2,如果感觉有死细胞的DNA,在细胞悬液中加入几滴无菌的DNAse(1mg/ml溶于水)将DNA链打断。轻柔地吹打细胞,防止对细胞膜造成物理损伤。

        3,如果细胞抱团是肉眼可见的,那就让细胞静置半分钟左右,然后吸取上半部分没有抱团的细胞悬液来传代。如果细胞抱团肉眼不可见,那可能没有特别好的分离方法,只能等细胞状态改善后将这部分细胞慢慢排除出去。

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        府宅

        有帮助

        用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞。

        对于贴壁非常牢固的细胞(如MDCK),为了细胞更好的状态,更漂亮的样子,建议分多批多次消化,这样才能最大限度地降低胰酶对细胞的损伤,保证细胞的状态能够最优。

        细胞生长密度不要太高,70%-80%就好(细胞刚刚基本成单层细胞,没有出现成层生长),这样细胞抱团的几率就大大减少了。如果细胞已经长成集落,可先将细胞低密度传代,第二天再消化传代,这样连续传三次,细胞抱团就会越来越小,这样几代过后,再按照常规消化方法和时间能将细胞逐渐传成单个的。

        消化过程中最好不要使劲摇动培养瓶,这样细胞特别容易成屑样脱落。细胞一旦脱落入悬液里就很难再将他吹打成单个(因为细胞没有受力点了,所以细胞很难分散开)。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开,严格控制好消化程度。

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