如何培养血管内皮细胞?

培养血管内皮细胞所用培养基与大动脉内皮细胞培养基相同，脐带静脉内皮细胞、大动脉内皮细胞易于培养，既使不加生长因子在最初几代细胞也会增殖良好。

内皮细胞也称为血管内皮细胞，通常指衬于心、血管和淋巴管内表面的单层扁平上皮，它形成血管的内壁。它们具有吞噬异物、细菌、坏死和衰老的组织，还参与机体免疫活动功能。该细胞的培养方法如下： 传代方法：将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约1min取出。传代用12mL CM1-1培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分3~6皿培养。 生长条件：37℃，5%CO2，CM1-1培养液。CM1-1培养液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培养液，含谷氨酰胺，含丙酮酸钠。 生长特性：细胞低密度时增殖较缓慢 存储条件：冻存则用6mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为6支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜转移至液氮中保存。

1）将多能干细胞于培养基 A 中分化成中内胚层前体细胞；2）将中内胚层前体细胞于培养基 B 中分化成血管内皮细胞祖细胞；3）将血管内皮细胞祖细胞于培养基 C 中分化成血管内皮细胞

在培养血管内皮细胞（EC）之前，我们要了解血管内皮细胞主要生长在血管的表面，由于其所处的独特位置不利于观察和研 究，所以体外培养 EC 显得特别重要。

首先需要将培养器皿预先用明胶或纤连蛋白或胶 原等粘附蛋白包被后，形成人工的 EC下基质层，可促进EC的粘附与生长。

其次，我们也需要利用酶消化法，酶消化＋机械刮脱法或单纯刮脱法将 EC 分离 下来，在适宜的条件下可贴壁并长成致密单层。

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内皮细胞一般采用内皮细胞完全培养基（cell systems,货号：4Z0-500)来维持细胞生长，需要注意的是才分离出来的细胞一般都不会采用无血清的培养基培养，因为无血清的培养基可能会导致细胞会有不贴壁的现象发生，需要更换无血清培养方式需等细胞稳定后才可开始更换无血清组分，按比列循序渐进更适合细胞的生长。