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问
制备小鼠胸腺细胞悬液时,加入1 %伊红-Y 染液后,为什么有时候细胞死亡过多?
Eason老歌迷
大多数情况都是你的样本质量有问题,如果是培养的细胞,一般都是培养时间过长,或者是因为你的实验手段导致细胞死亡。
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问
用lipo2000转染细胞是否需要换液,提取蛋白转染时间24h够吗?需不需要培养48-72h?
bamboopiggy
lipo2000毒性大,需要换液,提蛋白最好48h以后
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问
我的CHX(用DMSO溶的)实验是0 2 4 6h,请问对照的DMSO应该在什么时候加呢?
bamboopiggy
可以在一开始的时候就加上,然后和6h的一起收。因为DMSO单纯应该是不起作用的,时间就按最长的来。
2 回答
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问
请问悬浮细胞如果做transwell 测细胞的迁移能力?如果按照贴壁细胞的做法,悬浮细胞会附着在小室下层膜么,会不会直接掉落?
府宅
会掉落,也会附着。由于某些细胞自身的原因或某些膜的关系,有时细胞在穿过膜后不能附着在膜上,而是掉进下室
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问
血管内皮细胞在培养的时候一般都用什么培养基呢?
dxy_gwrp7ndq
可以用cascade biologics的Medium 200培养基
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问
有什么评价瞬转效率的方法吗(质粒进入细胞的多少)?而不是瞬转后蛋白表达效率。
bamboopiggy
转个带荧光的空质粒,可以根据荧光的强度,来判断瞬转的效率。
4 回答
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问
慢病毒感染293S悬浮细胞,感染效率低,有什么提高感染效率的方法吗?除了离心
bamboopiggy
提高一下病毒浓度试试,可以用PEG8000来浓缩病毒。
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问
流水细胞中细胞死亡有点多?
bamboopiggy
可能使细胞浓度低,通过的速度太快,对细胞损伤大,最好提高一下细胞浓度,或降低一些通过速度,
4 回答
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问
流式细胞分选速度如何确定?
bamboopiggy
这主要取决于要求通过的细胞的数目,如果你的细胞密度高,就可以降低一下速度,细胞密度低,就要加速,对细胞损伤就大一些。
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问
观察变移上皮时,用高倍镜观察的时候,基底层、中层细胞及表层细胞分界不明显怎么办?
师医生说
移形上皮细胞一般属于鳞柱交界,表层细胞呈立方形或椭圆形,体积较大,中层细胞为多边形,基底层细胞多为矮柱状或立方形。另外,在染色后是需要观察,细胞边缘的着色和厚度的。中层细胞多着色不均匀,基底层细胞染色最深,而且是边缘较厚!表层细胞多层裙边样。
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问
远志对小鼠的祛痰作用机制是什么,为什么是灌胃而不是注射
bamboopiggy
远志中含有丰富的植物皂甙,这种物质可以作用于能胃粘膜,刺激胃粘液的分泌,引起患者产生轻度恶心的感。 呕吐感形成以后,就刺激支气管产生连锁反应,分泌更多的物质来祛痰,所以对于痰多不化的人去,有较好的改善作用。所以这个玩意,要刺激胃黏膜,需要灌胃
4 回答
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问
慢病毒文库感染293T细胞,怎么确定MOI=0.3?
bamboopiggy
MOI的计算方法:MOI值=病毒滴度(TU/mL)×病毒体积(mL)/细胞个数,你可以调整病毒的加入体积和细胞的个数,使MOI=0.3
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9034 围观
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问
慢病毒稳转293细胞后,有的细胞会变大,有空泡状,是什么原因呢?
bamboopiggy
慢病毒对293细胞是有影响的,如果变大的细胞,和空泡的细胞不多,那就不用管,如果细胞数目多,需要降低加入病毒的浓度。
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问
fed batch过程中细胞数过多怎么降低细胞数提高活率
dxy_gwrp7ndq
可以适当提高补料渗透压,减缓细胞生长
3 回答
1219 围观
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问
质粒转染过程中对转染细胞的要求有哪些?
dxy_gwrp7ndq
转染时细胞密度以 70~90%(贴壁细胞)或 2×106~4×106细胞 / mL(悬浮细胞)为宜,细胞密度过高会严重影响细胞状态(周期进程阻滞,凋亡增加等)
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1796 围观
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问
表达量高的亚克隆细胞,个头特别大,一般细胞直径在16-17左右,但是它能到20左右,而且细胞数少,有什么方法可以降低细胞直径
bamboopiggy
是不是你的这个基因影响细胞的size?你可以直接挑出单克隆,进行单独培养,看看是否和正常的有差异。
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255 围观
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问
如何培养血管内皮细胞?
丁香清香
培养血管内皮细胞所用培养基与大动脉内皮细胞培养基相同,脐带静脉内皮细胞、大动脉内皮细胞易于培养,既使不加生长因子在最初几代细胞也会增殖良好。
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959 围观
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问
培养的细胞为什么总是一言不合就抱团,吹打之后也还是会这样?有什么很好的办法解决这一问题吗
丁香清香
引起细胞抱团的根本原因是细胞状态变差,且在吹打细胞的时候,那些状态好的细胞也会因为多次吹打而受损,所以我们认为最根本的解决方法是摸透培养的细胞的生长习性,让细胞保持较好的生长状态。
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1455 围观
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问
细胞培养过程中碰到的小黑点,到底是什么啊,一直都有
丁香清香
在细胞培养中常可见到细胞及培养液中有一些大小不等、形态不同的黑色未知颗粒。有可能是细胞碎片或者污染如:支原体、真菌和寄生虫等
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问
C2C12细胞分化的时候每次肌管分化的都不是很好,而且方向很杂乱,是什么问题啊?然后分化培养基中马血清浓度怎么选择啊各位大佬?
bamboopiggy
将1×105个细胞接种于6孔板,待细胞密度达80-90%时开始更换为成肌肉诱导培养基:含2%马血清、10µg/ml胰岛素的DMEM培养基,隔天换液,于诱导后5天,可见细胞分化成多核的肌纤维--这是我师姐用的方法。
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