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问
猪肺原代巨噬细胞适合什么培养基,1640还是高糖
bamboopiggy
巨噬细胞一般算悬浮细胞,适合用1640养
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问
PCR 扩增的体系条件应该怎么摸?一般要先从哪项开始?为什么进行复合扩增体系条件就要重新摸?
bamboopiggy
如果你不想摸条件的话,可以在你正式pcr cycle前加一个touch down的程序,这样基本都可以跑出条带来。
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问
分别收集EGF刺激0分钟、5、10、30分钟的1841乳腺癌细胞,提取蛋白质,分别进行酶解,然后采用iTEAQ中的不同核素标记。
bamboopiggy
EGF刺激0分钟、5、10、30分钟的1841乳腺癌细胞中,不同时间点酪氨酸磷酸化位点的变化
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问
原代猪肺巨噬细胞最长可以培养多长时间,有传代的可能吗
Eason老歌迷
一般都是原代培养。如果养的好,可以存活差不多两到三周吧。
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问
蛋白诱导时试了37 28 16℃ 都表达在沉淀形成包涵体了 16℃都没有还有再试温度(比如25 32℃)的必要吗?
未来9
诱导温度一般控制在15-25℃时能够减少蛋白包涵体形成,因此25℃以上应该可以形成包涵体。可以再改善温度以外的因素:比如诱导剂浓度等。
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问
his标签纯化目的蛋白跑胶呈现出拖尾的现象同一个胶其他样则不这样原因是什么呢?
bamboopiggy
感觉是你纯化蛋白上样浓度有点大,所以才出现了拖尾。
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问
成球实验培养的细胞球可以冻起来么
bamboopiggy
你最好把细胞球弄成单细胞悬液再冻起来,否则会损伤细胞球中间的细胞的。
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问
请问成球实验培养的时候需要一直摇么
bamboopiggy
sphere成球实验,不需要摇,但是需要用低吸附的培养板。,
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问
细胞没有污染,但经常有漂浮的细胞的原因
番茄炒蛋不加番哈哈
会不会是细胞的状态不好呢?如果是需要基质胶的,也可能基质胶不行吧,我不专门养细胞,有限的认知只能到这一步啦!
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问
有什么方法能区分凋亡,坏死,焦亡吗?
bamboopiggy
分别加入凋亡,坏死和焦亡的抑制剂,看那个能rescue你的细胞,你的细胞就是哪种死亡方式。
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问
细胞抱团该如何处理?
Eason老歌迷
如果是贴壁很牢固的细胞,可以多批多次进行消化,这样可以很大程度降低胰酶对细胞的损伤,避免细胞抱团。不要整太高的细胞密度,细胞生长密度过高也比较容易形成细胞成簇,百分之七十到八十的密度就好,这样可以降低细胞抱团的几率。如果是肉眼可见,可先让细胞静置30秒左右,然后吸取上半部分没有抱团的细胞悬液来传代。如果细胞抱团肉眼不可见,也没啥好办法,重新培养吧
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问
细胞不贴壁,怀疑是血清的问题,更换血清后,效果依然不好,还可能是什么原因导致的?
Eason老歌迷
细胞不贴壁有很多种原因导致的,你可以从多个角度来看。比如说是不是胰蛋白酶消化过多啊?是不是存在细胞污染,比如说支原体污染啊。或者你的培养基的问题,培养基pH值过碱;还有接种细胞起始浓度太低或太高啊。等等都可能引起
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问
DF1细胞张速过快,怎么办?
dxy_dfcqaej4
1.降低细胞密度2.培养基血清降一下
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问
HD11细胞系很难活过60小时原因?
bamboopiggy
永生化的细胞系如果活不过60h,就要考虑培养条件的问题,HD11细胞系的培养条件:DMEM/F12培养基,90%;优质胎牛血清,10%。培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
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问
想问下各位大佬:M-CSF诱导小鼠骨髓来源的BMDM,诱导完成后,种板的细胞培养基中还需要给予M-CSF嘛?
bamboopiggy
这个不是加不加MCSF的问题,而是BMDM不可传代,不可用胰酶消化,建议直接铺板,进行诱导,诱导后直接进行实验,不易过长时间培养,会恢复原来的圆形形态。
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问
[求助]肠神经元原代培养
天一湖医者
可以参考下这个文献https://xueshu.baidu.com/usercenter/paper/show?paperid=738210c5983acc2c5f8741f441763fcc
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问
收集鳟鱼胚胎提取物时,经过胚胎融化、过滤、离心厚,收集到的上清液,怎样稀释到理想蛋白质浓度?
我也是锦鲤ye
测量蛋白质浓度,用 LDF 将提取物稀释至理想的浓度。
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问
使用胰蛋白酶加入EDTA是为什么?
dxy_nkqusvl2
EDTA是一种可以螯合Mg2+、Ca2+的螯合剂,细胞表面很多结合蛋白都带有这个Ca2+,因为Ca2+的作用细胞之间还有细胞与培养瓶之间才能连接,所以加入EDTA能有效率的将细胞从培养瓶上消化下来。
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问
请问下培养液第一次和第二次配的颜色不一样 还能用嘛?右边是第一次配的左边是第二次配的
异乡人hyq
应该可以用的,估计与高温灭菌产生少量碳化有关。
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问
提取的蛋白有少量沉淀那可以有什么办法补救一下吗?
Eason老歌迷
蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀,建议蛋白浓缩后的最终浓度不要超过20mg/ml。如果已经出现沉淀,可以改进一下实验方法:1、离心力降低为原来的20-50%,2、改用截留分子量更大的超滤膜,3、在浓缩过程中取出超滤管,用枪头反复吹吸几次再继续浓缩,4、体积较大的样品可考虑选用超滤杯,减少沉淀的发生。据我所知,没啥补救
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