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        有什么评价瞬转效率的方法吗(质粒进入细胞的多少)?而不是瞬转后蛋白表达效率。

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        juyue2010

        wx-share
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        4 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        转个带荧光的空质粒,可以根据荧光的强度,来判断瞬转的效率。

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        用流式检测就可以了,非常方便。确定转染效率没有问题后可以转染带有目的基因的质粒。对于转染效果的验证主要取决于你的目的蛋白的性质。主要是mRNA和蛋白水平的验证。mRNA水平可以使用普通PCR或者定量PCR,前者是定性, 后者定量。但是最主要的还是蛋白水平的检测,如果是膜蛋白,那么流式检测最方便,如果是胞外分泌型那么可以用上清做ELISA或者Western都可以, 如果是胞浆分泌型的那么就用Western或者流式都可以。

        user-title

        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        使用流式细胞术检测转染效率可以更加精确的确定转染的效率,对转染效率进行量化。

        当转染的质粒DNA含有荧光蛋白基因是,可以通过荧光显微镜观察的方法来确定转染的效率,在荧光显微镜下,可以观察到荧光的强弱以及荧光的效率。

        user-title

        府宅

        有帮助

        荧光定量PCR所检测的是转染后细胞中待测基因的mRNA的表达水平;

        Western Blot所检测的是组织或者细胞中蛋白质的表达水平。

        他们都可评价

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