实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问Walker 256细胞可以连续传代多少次之后冻存

天一湖医者

原代分离的细胞最好在3代以内，如果是无限传代细胞无所谓。

3 回答227 围观

问想问下中间细胞聚团的原因是什么

dxy_90k7dzq

状态不好、老化的细胞，也可能会出现抱团生长的情况（比如换液不及时、长的太满才传代、污染等造成的细胞状态差）。

5 回答1053 围观

问WB跑完用丽春红染色什么都没有？

喵喵喵柏

你在跑之前有没有定量测浓度呢？跑的时候看到了溴酚蓝的颜色不代表真的有蛋白

4 回答740 围观

问细胞总是爱叠着长，之前不是这样的，请问是什么原因

bamboopiggy

这个感觉是你胰酶消化没有消化成单细胞，所以才逐渐扎堆生长

3 回答2179 围观

问细胞无明显污染但是总是飘很多

dxy_ybjer4q9

是不是培养基添加fbs和双抗的量不足导致的我们一般是培养基：fbs：双抗=50:5:1

4 回答2504 围观

问T3代细胞传代，生长9天细胞突然变黄，显微镜下镜检全都是死细胞，为什么细胞突然死亡？

bamboopiggy

考虑细胞数目是否太多？养的时间太长，导致细胞太拥挤，然后变黄一般就是细胞多了。在除外细胞污染的情况下。

5 回答538 围观

问想用荧光显微镜观察病毒感染细胞后的形态，是用普通光学显微镜还是需要荧光显微镜

bamboopiggy

这个要看你的病毒带不带荧光，，如果带荧光，可以用荧光显微镜，顺便还可以看一下转染效率

2 回答3250 围观

问病毒以MOI为1接种细胞，是不是需要提前测TCID50后再计算病毒接种体积

bamboopiggy

MOI是multiplicity of infection的缩写，中文译为感染复数，一般认为MOI是一个比值，没有单位，其隐含的意思是 pfu number/cell,即病毒颗粒数/细胞数。如果你的pfu/ml值为undefined109（9次方），那么1毫升病毒液中有10的9次方个病毒颗粒。如果你知道病毒滴度（pfu/ml）的值，那就简单些啦（因为病毒滴度（pfu/ml）的值得出是比较麻烦的），MOI=（p

2 回答3632 围观

问 P62跑出来条带淡背景很脏怎么办，我用的是abcam的一抗，1：10000。大佬救救孩子吧

Eason老歌迷

背景脏不一定是因为仪器不干净造成的，也有可能是蛋白降解或者整个实验过程中条件不合适造成的。

3 回答449 围观

问为什么用超滤膜包过滤出来的样品浑浊

天一湖医者

过滤后滤液仍然浑浊的原因1.滤纸破裂(1)玻璃棒下端紧靠在一层滤纸处，滤纸被戳破。(2)盛混合物的烧杯没有紧靠玻璃棒，滤纸被混合物冲破。2.混合物没有经过滤纸(1)液面高于滤纸边缘，混合物直接从滤纸和漏斗的间隙直接流下。(2)仪器不干净：漏斗下端不干净;下面收集滤液的烧杯不干净。

2 回答633 围观

问如何高效的学习异种移植实验技术

bamboopiggy

从jove上找视频看，然后自己用废鼠动手做，多练几次。如果能找到会做的人，指点一下效率会更高

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问关于组织消化后有组织块的问题

天一湖医者

因为胰酶消化时间太长细胞破碎掉了。可以试试不用胰酶，只用胶原酶，减少组织用量。

3 回答591 围观

问组织细胞消化液的注意事项

天一湖医者

消化酶在-20度下，放一个星期左右是没什么问题的，时间再长了不太好。

3 回答708 围观

问用于作为抗原对小鼠免疫的带His标签的目的蛋白有必要用Ni柱进行纯化吗？不纯化直接用来免疫可以吗？

天一湖医者

用于作为抗原对小鼠免疫的带His标签的目的蛋白是有必要用Ni柱进行纯化的。建议纯化后再用于ELISA.否则可能会产生很多非特异性的信号和比较高的背景.

2 回答467 围观

问为什么用考马斯亮蓝法，空白值比样品吸光度值高

天一湖医者

出现这个情况可能是你的样品中的蛋白质含量确实很低，低过一定浓度时，结果就没有参考价值了。也有可能是考蓝工作液存放时间太久失效了，可以用一些蛋白标准品（比如BSA）来检验一下考蓝工作液是否正常。如果要用缓冲液做空白组的话，就用和蛋白样品一样的缓冲液就可以了

3 回答1167 围观

问细胞降脂模型不好建立，诱导分化不了成熟脂肪细胞，脂滴较小是什么原因

Eason老歌迷

诱导剂一定要选好，不能用甲醇固定，因为甲醇为脂溶剂，可以用4%多聚甲醛水溶液固定既可。而且吧染色之后不能脱水，甘油明胶封片。

3 回答330 围观

问培养贴壁细胞，例如小肠上皮细胞用胰蛋白酶消化的时间，如何判断？

bamboopiggy

加入胰酶后，润湿一下细胞，然后吸出胰酶，不用吸的太干净。然后镜下观察，细胞变圆了，就可以终止胰酶消化了，容易消化的细胞大概30s-1min，不容易消化的，可以放37度数分钟，主要镜下观察形态改变

2 回答1347 围观

问在跑琼脂糖电泳时条带有拖尾，无法判断是纯合子还是杂合子，怎么避免这种情况？

bamboopiggy

感觉你提高一下琼脂糖胶的浓度，尽量拉开两条带，实在不行就加阳参吧。和阳参同一水平的，就是纯合子，否则杂合子

2 回答865 围观

问细胞为何生长不均匀?

Keven轩

可能是在细胞放入培养箱之前没有进行八字摇匀，导致细胞在培养皿中分散不均

5 回答1748 围观

问WB一直跑不出条带咋办

doczp1

先测一下浓度是不是太低啦？还有就是没有表达出来蛋白

3 回答329 围观

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