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        求各位大神解答?我的质粒浓度240纳克每微升,酶切后线性化载体条带就很弱 ,目的条带200bp直接看不到,这怎么解决呢?

        相关实验:酶切实验

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        dxy_vdv46ln6

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        8 个回答

        user-title

        n0y0j7

        有帮助

        为什么要切这个?连之前不用看小的,大的切完全就行了。连之后筛选阳的直接测序啊

        user-title

        未来9

        有帮助

        条带太弱,是底物浓度太低,或浓度太大,或反应时间太长。。。调整一下比例就好了。

        user-title

        Keven轩

        有帮助

        你浓缩一下质粒浓度应该就可以了

        user-title

        doczp1

        有帮助

        你看一下自己用的内切酶有没有过期,看看体系配没配对?或者质粒存放不当降解都有可能

        user-title

        无名WEZP

        有帮助

        用的什么试剂盒提取呢,质粒浓度是不是含有基因组的浓度,不是真实的吧

        user-title

        Guoood

        有帮助

        酶切鉴定一般一个反应切1ug质粒就够了,严格按照内切酶说明书操作,不要切过久,注意buffer有没用错。

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        这个浓度可以啊,你用的什么载体?什么酶?是双酶切还是单酶切?切了多久?酶切了多少ng的质粒?跑胶的浓度是多少?如果双酶切的话,你试试把两个酶分别切一下,看看能切成线性不,如果能切成,说明酶没有问题,然后你对比一下双酶切和单酶切的条带位置,如果位置有差异,说明你切开了。至于目的条带,不行,你还是pcr 一下,那样产量多。

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        天一湖医者

        有帮助

        可能是酶切过程中DNA降解了,如果是双切下来的片段很淡,可以看看切了多大的一段,太小的话容易弥散,或者没切开。

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