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问
没有CT值出现,可能原因有哪些?
天一湖医者
反应循环数不够 一般都要在35个循环以上,可根据实验情况增加循环(如至45循环), 但高于45个循环会增加过多的背景信号检测荧光信号的步骤有误 一般SG法采用72℃延伸时采集,Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号引物或探针降解 可通过PAGE电泳检测其完整性模板量不足 对未知浓度的样品应从系列稀释样本的zui高浓度做起模板降解 避免样品制备中杂质的引入及
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问
换新的一管酶,做实时荧光定量复合扩增的HRM曲线总是发现内参跑的不好,峰很低是怎么回事?
bamboopiggy
是不是你内参的引物用的时间比较久坏了?
4 回答
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问
关于细菌PCR电泳时候选择内参问题
未来9
细菌的内参常选用16S ;内参表达稳定,所以选择这个基因为基础,做矫正.在相同细菌量上比较目的基因的表达才是可信的结果
3 回答
1869 围观
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问
荧光定量PCR反应预变性的目的是啥?
bamboopiggy
为了使dna双链更好的打开,跟primer结合
3 回答
1830 围观
3 回答
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问
荧光定量PCR反应体系
bamboopiggy
500ngrna反转后,稀释到200ul,取4ul上样
4 回答
897 围观
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问
pcr扩增曲线有异常,总出现s型曲线
bamboopiggy
检查是不是都是在同一个孔,可能是这个孔被污染了,或者是热板盖歪了
3 回答
1015 围观
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问
跑pcr,怎么避免非特异性条带
bamboopiggy
注意annealing temperature,可以适当提高
4 回答
777 围观
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问
PCR的产物总是太少,是什么原因?
bamboopiggy
看看你是不是酶啊,引物啊,或者是模版加的浓度不对
4 回答
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4 回答
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问
pcr引物可不可以mix之后保存?
bamboopiggy
可以将pcr引物稀释后,按照1:1的浓度mix保存
5 回答
1509 围观
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问
提取细菌RNA需要去除基因组DNA吗?
bamboopiggy
需要去除基因组DNA,否则对实验结果有影响。
7 回答
1537 围观
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问
PCR产物需不需要凝胶纯化?
bamboopiggy
如果下一步要酶切,连接之类的,是需要纯化的
3 回答
529 围观
3 回答
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问
验证质粒是否导入感受态是应该做pcr电泳还是直接做测序好呢?
bamboopiggy
都可以,一般会选择pcr鉴定,但是现在有些实验室有钱。就直接送测序
4 回答
725 围观
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问
洗涤RNA沉淀倒上清时候,倒不干净,我可以用枪头吸吗?
Junego
可以,少量残留液用干净小枪头吸,不同样品之间记得换枪头。
6 回答
724 围观
6 回答
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问
自己引物设计软件和文献报道不一样
bamboopiggy
只要引物好用,不用管是不是和文献报道的一样,只管用
6 回答
881 围观
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问
rtPCR引物长度336bp可以用作引物吗?
bamboopiggy
可以用作rtPCR的引物,因为你已经找不到更合适的了,产物稍微长一点也是可以的。注意一下你的延伸时间就好
4 回答
677 围观
4 回答
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问
引物设计提示多条合适,如何从中选择最优的
bamboopiggy
不用,你可以选比较靠前的引物,产物长度在50-200bp左右u
5 回答
851 围观
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问
如何选择多重荧光定量pcr的报告基团和淬灭基团,选择原则是什么?淬灭基团是不是一样比较好?
天一湖医者
根据荧光定量PCR仪荧光通道,选择适配的荧光基团,优先选择常用的荧光基团,如FAM、VIC或CY5等;2. 根据荧光基团类型选择淬灭基团。早期的淬灭基团TAMRA,自身会发出荧光信号,干扰检测结果,后续慢慢地被其他淬灭基团替代。目前淬灭基团最常用的就是BHQ、NFQ-MGB或QSY等;3. 进行多重qPCR检测时,每个通道要选择不同的荧光基团,且避免各标记基团的激发和发射波长重叠,出现荧光干扰的情
3 回答
7858 围观
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问
RTPCR实验高浓度的cDNA会对最终结果造成影响么?
bamboopiggy
模版浓度太高,可能与引物结合不完全,也可能很早就达平台期,看不出差别。一般要求酶和引物是过量的
7 回答
1904 围观
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问
大家有没有扩长片段基因(16000左右)的酶和体系的推荐呀?
天一湖医者
这是最常规的PCR,随便用哪家的酶都可以。
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598 围观
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问
以片段为模板扩增会导致产物品质降低吗
汤姆卜丽波
是会低一些,但是我们也有这样扩增过,还是能扩出来的
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