bamboopiggy
注意annealing temperature,可以适当提高
迟C迟
1、设计特异性引物,这是避免非特异性条带最关键的点。
2、提高退火温度,可提高目的条带特异性。
3、PCR产物切胶回收,可得到特异性目的条带。
未来9
必要时重新设计引物。减低酶量或调换另一来源的酶。降低引物量,适当增加模板量,减少循环次数。适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性,65℃左右退火与延伸)。
天一湖医者
提高退火温度,添加DMSO,冷启动,touchdown,更换更特异的引物,
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