如何选择多重荧光定量pcr的报告基团和淬灭基团，选择原则是什么？淬灭基团是不是一样比较好？

根据荧光定量PCR仪荧光通道，选择适配的荧光基团，优先选择常用的荧光基团，如FAM、VIC或CY5等；

2. 根据荧光基团类型选择淬灭基团。早期的淬灭基团TAMRA，自身会发出荧光信号，干扰检测结果，后续慢慢地被其他淬灭基团替代。目前淬灭基团最常用的就是BHQ、NFQ-MGB或QSY等；

3. 进行多重qPCR检测时，每个通道要选择不同的荧光基团，且避免各标记基团的激发和发射波长重叠，出现荧光干扰的情况

选择报告基团时⾸先要确认激发波长和发射波长与仪器是匹配的。例如在我们的StepOne仪器上就不能够使⽤第三通道的荧光染料如NED, TAMRA等。对于多重荧光反应，标记不同探针的报告基团染料的最⼤发射波长应该⾄少有15nm的差异

对于淬灭基团，必须要保证其吸收光谱与报告基团的发射光谱有重合。例如第⼀代双标探针，使⽤TAMRA作为淬灭基团（吸收波长558nm），可以淬灭FAM（发射波长517nm）和VIC（发射波长552nm）。但是由于TAMRA有⾃⼰的发射荧光（577nm），从⽽会增加背景荧光信号，同时还要占⽤⼀个荧光通道，减少了仪器的检测通道，因此，TAMRA探针现在使⽤的已经⽐较少了。⽽⽬前使⽤最为⼴泛的是诸如MGB-NFQ，QSY等⽆荧光的淬灭基团，它们吸收报告基团所发出的荧光之后，会以热量形式将能量散发出去，⽽不是以荧光的形式散发，所以背景信号很低，可以达到更⾼的检测灵敏度。

不是。对于5通道的机器来说，你的发光基团就要与5个的滤光片对应，分别在这5个滤光片的波长范围内选择标记。淬灭基团主要是接收发射基团的光，所以波长通常要比发光基团长一些，也就是每个染料都有自己相对应的淬灭基团。