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问
提取出的RNA在逆转录之前跑胶验证,这一步是杂志必须要求的么,具体怎么跑呢,和DNA一样么
汤姆卜丽波
有着杂志会要求跑一下,看RNA有无降解,保险的话还是跑一次,如果杂志要求了。步骤如下:将制胶用具用70%乙醇冲冼一遍,晾干备用。配制琼脂糖凝胶。 ①称取0.5g琼脂糖,置干净的100ml 锥形瓶中,加入40ml蒸馏水,微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。 ②待胶凉至60--70 ℃,依次向其中加入9ml甲醛、5ml 10X MOPS缓冲液和0.5μ|溴化乙锭,混合均匀。 ③灌制琼脂糖凝胶。样品准备:
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问
RTpcr过程中提取出来的RNA必须要跑胶验证有无降解么?
bamboopiggy
如果实验严谨的话,是要跑一下的,但是现在一般提完直接逆转,除非实验出问题,很少有人会去检测RNA是否降解。
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问
做qPCR必须每次要做三个生物学重复和三个技术重复吗
balalaLy
技术重复是同样的sample在一次pcr实验中重复三个复孔,你加样熟练的话也可以只做2个复孔。三次生物学重复是收三批sample
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问
检测新冠的qPCR出来的ct值正常范围是多少?
bamboopiggy
Ct值越低,代表病毒浓度越高;Ct值越高,则表示病毒浓度越低。 阳性:Ct值<37,可报告为阳性。
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问
qPCR中Mg2+浓度控制在哪个范围比较合适?
bamboopiggy
一般情况下Mg2+浓度为1.5~2.0mmol/L为宜。但是现在的qpcr的酶一般都是mix,已经给加好Mg2+了,不需要单独加
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问
不同体积的 PCR 管,我该怎么选呢?
bamboopiggy
根据你的实验目的,以及你用的pcr的可以放多大的管子来决定。
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问
PCR 管材质厚度不一,是不是厚点的稳定性更好呢?
bamboopiggy
这个和管壁的厚薄没啥关系,主要取决于你用的盖或膜的透光性。
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问
PCR 封板膜有好多种类型,哪种实验效果更好呢?
bamboopiggy
其实都可以,只要你每次实验用的都是同一个牌子的就没有问题,还有就是你自己封,要封紧。虽然这么说,我还是推荐用国外大品牌的,透光度和密闭性都好一些
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问
qPCR的内参应该怎么选
汤姆卜丽波
内参主要的作用就是校正和标准化,
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问
real time RT-PCR如何保证重复性
bamboopiggy
这个不是污染不污染的,只要你加样准,一般问题就不大,加样准,前提是枪和枪尖要match,保证每次加进去的样本量是一致的
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问
RT值过高。最近实验细胞给药后杀伤效果跟之前相近,但同样方法下做出的RT值过高,有时候能超过40,大家帮忙提提问题
bamboopiggy
你说的是CT值过高吧?超过40基本代表没有什么表达了。要不你试试降低药物浓度,有部分细胞能活的情况下做这个实验。
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问
琼脂糖凝胶电泳条带扭曲
bamboopiggy
可能是你的胶没有配匀,或者是你pcr产物的浓度抬高了。
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问
细胞形态在四代分瓶后发生改变
balalaLy
可能是细胞老化了,纤维化,尽量在第2,3代的时候进行实验
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问
蛋白纯化过程中,37℃过夜摇菌产量不丰富,如果提高摇菌产量?
bamboopiggy
做预实验,确定到底是什么温度,什么转速,会影响你菌的产量,还有就是看你用的什么表达载体,不同得载体,摇菌的要求也不一样
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问
石蜡包埋的样品如何检测miRNA?
bamboopiggy
有试剂盒啊,你直接买个试剂盒来提取就可以。你直接在搜索引擎里搜:石蜡包埋样品 miRNA 提取 既可以找到。
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问
miRNA的靶基因验证用荧光定量PCR方法还是用蛋白免疫印迹方法?
bamboopiggy
这两种方法都可以啊,最好是都做,这样更能说明问题。
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318 围观
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问
CHIP实验超声时片段总是打的不够碎怎么办
bamboopiggy
做好预实验,多做几管,确定合适的超声强度和时间。
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问
做qpcr 时候设计引物一定要垮内含子嘛?
dxy_jrj59zn3
你的意思是引物设计在两个外显子的连接点上吧?其实可以把两条引物分别在两个外显子上,这样应该会比较好
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问
qPCR的实验数据如果有很多该怎么处理呢?数据少还能一点一点算,但是多的话,真的很头疼啊
whilt-shirt
可以做一个Excel公式模板,数据复制后就能直接得出结果
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问
求助荧光定量PCR的结果分析 RQ min和RQ max的算法?
天一湖医者
∆Ct SD =SQRT(Ct targetSD^2+Ct referenceSD^2
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