丁香通
丁香园
论坛
医药招聘
丁香医生
更多
调查派
用药助手
丁香搜索
医药数据库
来问医生
我要登录
|
免费注册
|
我的丁香通
企业机构:
成为企业机构
个人用户:
个人中心
移动端
搜实验
大家都在搜
大家都在搜
0 人通过求购买到了急需的产品
免费发布求购
搜索
发布求购
实验专区
实验库(10000+)
实验问答
实验专题
热门视频
前沿资讯
科研者之家
丁香通
>
实验专区
>
实验问答
>
全部
实验问答
27,950,865 科研人在看
我要提问
全部
细胞
免疫
蛋白质
PCR
DNA
RNA
微生物
动物
遗传
生物信息
其他
问
染料法qPCR 为什么扩增曲线到达平台期后会出现下降?会影响结果吗?
whilt-shirt
有可能是模板和引物浓度太高导致的,这种情况会使基因表达偏低
3 回答
1786 围观
3 回答
1786 围观
去回答
问
对于pcr引物设计和荧光定量pcr引物设计的根本区别在哪里?
dxywode
一、方法不同1、普通pcr引物设计:引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。2、荧光定量pcr引物设计:通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,标记跟踪PCR产物进行实时监测反应,利用与之相适应的软件对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度二、原理不同1、普通pcr引物设计:为了找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列。2、荧光定量pcr引物设计:在PCR反应体系中加入荧光基团
3 回答
1155 围观
3 回答
1155 围观
去回答
问
qpcr和RT PCR在定量定性上面有什么区别?
Eason老歌迷
RT-PCR是PCR的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为cDNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。QRT-PCR在RT-PCR体系中同时加入内参标基因的引物,使目的基因和内参基因在同一条件下同时扩增。实时PCR属于定量PCR(Q-PCR)的一种,以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。他俩相结合,能用微量的RNA来找出特定时间细胞组织内的特别表达的遗
7 回答
6029 围观
7 回答
6029 围观
去回答
问
发文章时pcr实验要哪些原始数据
Eason老歌迷
可能需要你的原始图片,甚至还有荧光定量的数据。或者一些溶解曲线,之类的。
6 回答
15362 围观
6 回答
15362 围观
去回答
问
做qPCR曲线出现异常?
whilt-shirt
有可能是模板浓度太高了,在基线期内就起峰了,仪器会默认起峰的线条仍为基线部分,将扩增曲线往基线位置下拉,因此你的曲线就趴下来了。这种情况大家也不要慌,可以减小基线终点(例如基线期默认 3 - 15 个循环,改为 3 - 10 个循环),重新分析数据,一般都能得到一个比较好的结果。
5 回答
1000 围观
5 回答
1000 围观
去回答
问
DNA扩增的时候,PCR条带拖尾?
dxywode
拖尾在生物专业词汇叫做smear。造成此的原因有多种。一般来讲,有以下几点:1,引物设计不佳,造成了拖尾现象。2,PCR中DNA浓度加的太多,造成了拖尾。3,mg2+浓度加的太高,造成了拖尾。4,跑胶电压不合适,造成了拖尾。5,退火温度不合适,造成了拖尾。这些都可能造成拖尾,请认真分析之。谢谢。
5 回答
6146 围观
5 回答
6146 围观
去回答
问
q-pcr验证高通量测序结果,结果为啥反复横跳?
汤姆卜丽波
这样的结果是不行的,三次独立重复的话。每次都要提RNA之后测浓度,必要时还要跑胶防止降解
6 回答
835 围观
6 回答
835 围观
去回答
问
EP凝胶的聚合缓冲液是什么?
dxywode
琼脂糖凝胶电泳缓冲液常用的缓冲液有TAE和TBE,而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。
2 回答
680 围观
2 回答
680 围观
去回答
问
悬浮细胞做转染,lip3000,6孔板每孔种多少细胞转染效率比较高,现在种15万个细胞每孔,感觉转染效率不高
dxywode
如遇转染效果不佳,可采取优化方案对实验进行优化:1. 优化转染条件包括:转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。2. 同时细胞污染也是造成细胞死亡,转染效率低下的一大原因。转染细胞用的质粒必须保证无菌。分享一个小秘诀:将提完质粒后或者提的最后一步,用75%乙醇沉淀,这样就除菌了。3. 转染用的质粒首先要保证数量,一般为2μg以上。如果质粒纯度不够或者含有细菌LPS或其他
3 回答
1786 围观
3 回答
1786 围观
去回答
问
如何建立稳定铂耐药的卵巢癌细胞?是否需要先检测敏感细胞的IC50?检测IC50的规范操作是什么?
balalaLy
先检测IC50,再用比IC50高的大剂量冲击,接着用IC50的剂量维持一段时间,再重新测IC50
3 回答
517 围观
3 回答
517 围观
去回答
问
关于gDNA基因组DNA
汤姆卜丽波
一般pcr.扩增模板浓度几ng到100ng都可以,普通的酶就可以扩出来,应该不是浓度的问题,跑之前确定一下模板没有降解,然后引物特异性和有效率
5 回答
1857 围观
5 回答
1857 围观
去回答
问
imageJ处理WB条带时,为什么要去背景?去背景的原理是什么?
balalaLy
imageJ读取的是所选区域的灰度值,如果不去背景,会干扰读取值,结果偏差会很大
3 回答
1927 围观
3 回答
1927 围观
去回答
问
染色体做完镜下看是实心的,像一个细的木棍
dxywode
只能是大概说一下,因为缺少图,其实你多看一些片子就会发现,做核型分析的时候,视野中出现的结构应该有分离良好的染色体,边缘很粗糙的圆形,边缘光滑的圆形大致三种类型。边缘粗糙的那种就是染色质在形成染色体的过程中。丝状的染色质盘绕在一起,是很难分开的,表现出来就是一个圆形的细胞核的样子。
2 回答
635 围观
2 回答
635 围观
去回答
问
牛卵母细胞wb一抗好难找呀,买了几个都做不出条带 什么原因求大神指导!
汤姆卜丽波
可以看一看相关的文章,看看文章里的抗体是在哪里买的,问通讯也可以
3 回答
531 围观
3 回答
531 围观
去回答
问
加尾法逆转录miRNA的qPCR如何区分前体和成熟体?
汤姆卜丽波
前体和成熟体的大小序列都不一样。除非你特别设计不同引物,不会一起扩增
4 回答
632 围观
4 回答
632 围观
去回答
问
qPCR实验平行的孔总是重复性很差,该怎么改进呢?加样时有推荐的先后顺序吗?
balalaLy
每个孔加的量很低,要留意一下有没有把样品都完全打出去了,枪头上有没有残留
4 回答
236 围观
4 回答
236 围观
去回答
问
半定量PCR和定量PCR在斑马鱼这类模式生物上的类似实验自己可完成吗?还是需要专业设备
汤姆卜丽波
就和其他生物一样操作就可以了,组织取核酸,不需要专业设备
4 回答
361 围观
4 回答
361 围观
去回答
问
跑荧光定量pcr 曲线有双峰,primer设计引物分数是满分,求大神给个建议。
balalaLy
如果是主峰前面出峰,一般是引物二聚体,如果是后面,可能是非特异扩增,可降低引物浓度,退火温度和镁离子浓度
6 回答
794 围观
6 回答
794 围观
去回答
问
做了一次,因为我的细胞增殖速度很慢,培养24h基本没有增殖。所以我铺板的细胞密度挺大的,每孔undefined10五次。铺板后第二天换低血清培
balalaLy
你的药物会干扰cck8的结果,加cck8之前最好还是要洗一下。如果药物促凋亡效果明显的话可以不做饥饿处理。
3 回答
683 围观
3 回答
683 围观
去回答
问
PD-1的流式抗体要怎么选择?
balalaLy
一种抗原就对应一种抗体(各种剪切体、修饰后的另说)
3 回答
1126 围观
3 回答
1126 围观
去回答
1
•••
707
708
709
710
711
•••
1009
跳至
页
意见反馈
合作咨询
提问
扫一扫
领取干货资料
反馈
TOP
打开小程序