实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问请问克隆引物和qPCR引物有什么区别，可以用qPCR引物做基因克隆用吗？

bamboopiggy

看你的实验目的，克隆的引物一般是在基因的起始和结尾设计，但是qPCR的引物的产物一般是50-200bp左右的，如果你要克隆50-200bp左右的片段，就可以用qPCR的引物。

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问请问qPCR引物合成出来大概多久内要用完？怎么样验证一下我放了很久的qPCR引物是否还可以用？

天一湖医者

如果放入-20度的话，可以一年。

5 回答843 围观

问请问我的目的基因的本身GC含量就比较高，该怎么样设计克隆引物？

秋秋欣欣

克隆引物就正常设计就可以，退火温度可稍微设置高一点

3 回答342 围观

问PCR条带弥散严重，怎么解决呢？

天一湖医者

1.酶量过高。减少酶量;酶的质量差,调换另一来源的酶。2.dNTP浓度过高。减少dNTP的浓度。3.MgCl2浓度过高。可适当降低其用量。4.模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng,而基因组DNA则应<200ng。

4 回答2002 围观

问1.引物二聚体严重是怎么回事？2.CT值偏大（CT值的大于等于30）是什么原因呢？3.体系双扩增的原因？

天一湖医者

引物设计不合理，两条或一条引物的3`端有互补序列，造成自己配对延伸而扩增。建议重新设计引物，，或者降低退火温度、增加模板和引物的量试下。

3 回答540 围观

问wb 分离胶里面没凝好

bamboopiggy

实在不放心，就延长一下等待时间，一般混匀了，不会出问题的

5 回答477 围观

问请问sgRNA化学合成靠谱吗

汤姆卜丽波

如果你需要在几天内进行多个sgRNA的转染，以此筛选某个基因重要功能靶点或者需要快速敲除多个基因时；涉及在细胞/基因治疗领域中的CRISPR解决方案时；涉及的细胞是原代T细胞、造血干细胞或祖细胞的基因编辑选择它比较合适

3 回答467 围观

问p12细胞培养

秋秋欣欣

培养细胞所需要的基本材料，培养瓶或皿，培养基，胰酶，以及基本耗材。

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问肝星状细胞提取

天一湖医者

1. 大鼠腹腔麻醉后在超净台上剖腹，进行门静脉插管。2. 以D-Hanks‘液灌注，同时剪开下腔静脉，冲掉血液后，改灌以100 ml 酶消化液I(0.05% IV 型胶原酶)。 3. 待肝脏变软后，离体肝脏并剪碎，继续以酶消化液II(含20U/ml DNase I 的0.05% IV 型胶原酶)消化15 min，尼龙网过滤后以450 g 离心5 min(4℃，下同)。4. 以HBSS 重悬沉淀至

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问OT-1和OT-2小鼠的鉴定

bamboopiggy

OT-1小鼠是体内CD8+T特异性识别OVA，OT-2小鼠是体内CD4+T特异性识别OVAOT-1 的原始参考文献，Enhancement of Adaptive Immunity by the Human Vaccine Adjuvant AS01 Depends on Activated Dendritic Cells 以及另外一篇文献：Quantitative PCR for detecti

4 回答8508 围观

问求助|大家有用聚乙烯醇自己配抗淬灭封片剂的吗，请问所需溶剂及比例

bamboopiggy

配方包括：聚乙烯醇、甘油、重氮双环辛烷、金属离子螯合剂、碳酸盐缓冲液、Tris‑HCl缓冲液、防腐剂、水。这个现在很便宜，建议直接买了省事。

3 回答365 围观

问做最小抑菌浓度，溶液和药物混匀后要震荡培养吗？

bamboopiggy

要震荡培养，但是如果你实在没有条件，也可以直接放37度

3 回答448 围观

问淋巴瘤sudhl-8培养瓶里出现沉淀是污染了吗

bamboopiggy

感觉是污染了，你看看吹散以后，或者是稀释一下细胞以后，还是很快会这样么？

4 回答232 围观

问请问各位怎么申请cytoscape里cluego软件的权限呢

bamboopiggy

查一下你邮箱的垃圾邮件里面有没有，有的会被误入到垃圾邮件

3 回答1962 围观

问酶切实验中如何避免假阳性

dxy_g9y5gije

首先，多做几个重复，这样容易发现是否出现假阳性其次设置对照，未酶切片段和酶切片段同时跑胶，应当存在明显差异

5 回答630 围观

问想用转铁蛋白做动物实验，请问一下人源的或者牛的转铁蛋白能用于小鼠的实验吗？

汤姆卜丽波

可以的，有很多实验都是这样操作的

3 回答557 围观

问能不能分享一些动物肠道吻合的经验和技巧？

汤姆卜丽波

1、要保证吻合口处无张力，吻合肠段的肠袢应游离足够长度。2、要保证吻合口有良好的血液供给，应可清晰看到血管分支供应吻合口;肠管在无肠钳夹闭的情况下，肠管断端切缘应有活动性出血;肠管断端处的肠系膜不可分离过多，一般距断端1.0cm以内，否则易影响吻合口的血液供应。3、吻合口处的缝合过稀或打结过松可导致吻合口不愈或吻合口漏。4、肠壁边缘内翻不宜过多，以防止造成吻合口狭窄。5、术中应注意无菌操作，做好

3 回答821 围观

问天然产物生物合成的问题

汤姆卜丽波

同位素示踪法标记，结合生物信息学、分子生物学、分子遗传学以及生物化学等方法来研究天然产物生物合成的精细过程，除了将天然产物结构与相应生物合成基因相对应，还包括阐明生物合成的调控机制。还可以应用基因组测序。

4 回答538 围观

问下面图分别是什么意思？感谢

汤姆卜丽波

左右两边是一个意思两种图示，都是突变的定量，串珠的位置及大小表示突变率，右图看不同颜色区域的面积

2 回答428 围观

问组织冷冻之后想做流式有些疑问？

镜泽BioLab

做不了流式，流式是活细胞染色。病理染色也不能做，细胞内的水分形成冰晶破坏细胞形态。只能做WB和PCR

4 回答2879 围观

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