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        PCR问题,求助一下?

        相关实验:任意引物 PCR

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        浪子在天涯

        PCR的结果有引物的二聚体,但是却没有目的条带,用来做control的DNA模板的结果也是一样的,怎么解决呢?

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        6 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        先确定你的primer正确,然后试着降低annealing temperature试试

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        dxy_g9y5gije

        有帮助

        挨着检查一下吧,模板,酶,引物,这些都有可能导致这样的结果。

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        Eason老歌迷

        有帮助

        原因可能有很多,可能是你模板问题,温度没设置好,尤其是退火温度,还有延伸时间,酶的活性,引物的设计,反应体系,最好设置阳性对照等等。

        user-title

        汤姆卜丽波

        有帮助

        一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数过多有关。

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        丁香清香

        有帮助

        1.确认在样本中含有目标片段,cDNA这段序列和上下游引物的设计是匹配的,别弄反了
        2.确认模板的质量。需要对模板进行OD260/280的检测,以确定模板的完整性和浓度是否符合要求。如果觉得不好弄,就多加点模板再试试。
        3.引物本身的互补碱基有多少个?
        4.梯度退火的范围是多少?通常Tm值要比引物公司给出的值低3-4度。我曾经最高尝试过70C开始的touchdown PCR,就是从70C开始退火,每2个循环退火温度降低1度,也可以增加扩增的特异性。

        如果序列没有什么特别的,只有引物二聚体的话,通常要么是模板,要么是引物设计出问题了。因为体系中没有匹配的序列供引物去识别和结合,只能形成二聚体了。

        user-title

        秋秋欣欣

        有帮助

        换引物啊,可能是引物问题,也可能东西降解了

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