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科研学霸天团,48小时有问必答
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免疫组化切片保存问题
balalaLy
用中性树胶封片可以放室温长期保存
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问
qpcr的引物应该有什么网站或者工具可以检查它的扩增效率吗?每次设计的都不太好用
balalaLy
引物设计的软件在设计过程中就有引物质量的评价反馈,也可以到pubmed上blast一下
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问
384孔板,rt-qpcr实验结果的处理?
balalaLy
跟96孔板的处理一样啊,只是工作量大了而已
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问
请问脂血样本对ELISA实验结果有什么影响呢
汤姆卜丽波
不同程度的脂血标本对 ELISA 法检测结果的影响具有很大影响,会出现吸光度高的假阳性,容易出现误诊
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问
qPCR曲线形状解释
汤姆卜丽波
模板浓度太高了,在基线期内就起峰了,仪器会默认起峰的线条仍为基线部分,将扩增曲线往基线位置下拉,因此你的曲线下滑,这种情况大家也不要慌,可以减小基线终点(例如基线期默认 3 - 15 个循环,改为 3 - 10 个循环),重新分析数据,一般都能得到一个比较好的结果
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问
Transwell实验用什么固定液固定细胞比较好。
balalaLy
甲醇和多聚甲醛都用过,效果差不多
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问
Protein a纯化
bamboopiggy
你应该是放tris碱吧?本身就是酸性洗脱,你再放tris酸,不合适,用tris碱去中和
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问
膜蛋白提取
bamboopiggy
这个蛋白比较大,你可能需要比较多的细胞,操作过程注意冰上进行。一般国外公司的kit会比较好用。
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问
求助:请问进行乳腺细胞添加氨基酸试验时,细胞培养时间怎么确定?什么时候收集细胞?
balalaLy
常规都会先做一组24-96小时的
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问
药物促进细胞增殖如何确定药物最佳浓度?
bamboopiggy
一般做药物要有个IC50,你可能需要再扩大一下浓度找到一个IC50。当然目前你已经得到一个比较好的结果了,就是随药物浓度增加,促进细胞增殖的作用在增加。
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问
请问大家jurkat转染siRNA的话,前一天铺板,铺12孔板的话,都是铺多少细胞呀
balalaLy
一般是按照转染时的细胞数达到50-60%的密度,如建议不要铺太多,多了影响转染效率,少了可以再等一等
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问
细胞计数和铺板
balalaLy
可能你前后计数的时候没有再次混匀,导致误差。传代不需要计数那么准确的,有些细胞多有些地方少是因为你铺板的时候没有晃匀
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问
脂肪肝造模(LMH细胞)
汤姆卜丽波
油酸存储液:10mM OA+10% BSA 溶液6ml(20% BSA溶液 3ml,20mM OA溶液3ml 1:1混合)工作浓度:100-200uMOA(50X使用)棕榈酸存储液:20mM PA+20% BSA 溶液6ml(40% BSA溶液 3ml,40mM PA溶液3ml 1:1混合)工作浓度:100-400uMPA
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问
小鼠关节腔注射
bamboopiggy
看文献,大鼠关节腔注射体积是50ul,小鼠要比大鼠的少
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问
免疫组化定位问题求助
bamboopiggy
你用的抗体是哪个货号?那个公司的抗体有好几个货号,看他们染肿瘤细胞,核也很干净
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问
小鼠的脾脏做流式需要用到淋巴细胞分离液吗
yanlai000
我们一般都要淋巴细胞分离液密度离心,能裂红最好
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问
为什么有时候pcr产物在凝胶电泳的时候跑不出加样孔?
不下雨的早晨
胶凝固的时间不够久 ,电泳液用太多次,存在蛋白污染
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问
羧甲基纤维素钠的粘度?
whilt-shirt
暂时没有有关CMC-Na在灌胃方向对于粘度指标得报导。一般的,建议在保证溶解度的前提下,选择粘度尽量小的CMC-Na。文献中一般在 1500 mPa.s 以下
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问
有没有适合新手做的生信综合实验
天一湖医者
可以尝试一下h1n1流感病毒分析.
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问
如何把小鼠的中脑黑质分离出来呀?
汤姆卜丽波
将⼩⿏快速断头处死,取出完整脑,将脑⾄于-80度速冻5min。取出速冻好的⿏脑,⾄于冰上,切取前囟(在剥离的⿏脑上,前囟和腹侧的视交叉前缘处于同⼀垂直⾯上)后,3mm-4mm的冠状切⾯。在⿏脑切⾯上,⿊质脑区的颜⾊是与其它脑区颜⾊不同的,有⽐较清晰的界限,⽤镊⼦或者其它⼯具挖取即可。
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