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        做ChIP试验,必须做甲醛固定么?

        相关实验:染色质免疫沉淀

        user-title

        DXY泡沫呀

        做ChIP试验,必须做甲醛固定么?

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        5 个回答

        user-title

        月下扣动板机

        有帮助

        不一定,视样品及试验方案而定,做甲醛固定的为X-Chip,而不需要固定的为N-Chip,甲醛能有效的使蛋白质-蛋白质,蛋白质- DNA,蛋白质- RNA交联,形成生物复合体,防止细胞内组分的重新分布,甲醛的交联反应是完全可逆的,便于在后续步骤中对DNA和蛋白质进行分析,甲醛的交联反应可被加入的甘氨酸终止。

        user-title

        dxyjonas

        有帮助

        不一定,有几种其他固定剂在某些实验中效果很好,但甲醛是最常用的,因为它可以将距离较近的DNA和蛋白共价连接在一起。当然,对于一些距离较远的分子,可以使用其他固定剂,如DSG。在设计ChIP实验时,这些都是需要考虑的因素,但在大多数情况下,甲醛是固定样本的良好选择

        user-title

        迟C迟

        有帮助

        很多实验室常用的37%甲醛其实并不适合用于ChIP实验固定细胞和组织。 首先37%甲醛溶液含有甲醇:甲醇起到稳定剂的作用,可以防止氧化和甲醛缩聚,但是甲醇存在的情况下,更容易有较大分子量的染色质产生,而这些染色质不容易被打断。

        user-title

        dxyv9281

        有帮助

        甲醇的加入会导致细胞渗透性增加,导致更多的甲醛进入细胞。如果不加入甲醇。甲醛不是很稳定并且容易聚合,会降低固定效率。

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        不一定,视样品及试验方案而定。做甲醛固定的为X-ChIP,而不需要固定的为N-ChIP。甲醛能有效的使蛋白质-蛋白质,蛋白质-DNA,蛋白质-RNA交联,形成生物复合体,防止细胞内组分的重新分布。甲醛的交联反应是完全可逆的,便于在后续步骤中对DNA和蛋白质进行分析。甲醛的交联反应可被加入的甘氨酸终止。

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