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问
从超声纯化的蛋白怎么保存,可以放在负二十吗,可以放多久,如果制成wb的上样品,需要怎么保存?
天一湖医者
可以。1. 短期保存(24 小时内)大多数的蛋白质可以保存在 4°C。2. 在 4°C 超过 24 小时 需要考虑对蛋白样品灭菌过滤(使用 0.22 µm 过滤器),或者加入抑菌剂(例如 0.1% 叠氮化钠)以避免细菌生长。值得注意的是,并非所有蛋白质都能在 4°C 长时间保持稳定。3. 长期保存(一周以上)需要将蛋白样品冻存。
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问
各位大佬wb条带宽窄不一样什么原因
林夕娜娜
胶的问题,没有凝好,或者是没有混匀
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问
请问各位大神,磷酸化pi3k(分子量85)跑出来泳道背景很深
bamboopiggy
你试试用5%的脱脂牛奶封闭看看,可能会好一些
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问
请问hepG2能长满?
秋秋欣欣
HepG2可以长满啊,成团估计是你传代的时候没要吹散吧
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问
用本源抗体时,如果杂带特别多,主带又不特别浓,怎么确认目的条带?根据大小盲猜的么?如果那个位置靠近的上下也都有条带呢?
Eason老歌迷
大部分抗体的检测结果与理论分子量比较相近,检测结果误差在10-15%以内都可以认为是正确条带。
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问
请教,蛋白条带出现杂带,是抗体
Eason老歌迷
可能是你的抗体特异性不高。你的蛋白有没有降解,你的目的蛋白会不会形成二聚体。封闭时间是不是太短。
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问
Wb跑出来的条带背景很深,杂带很多的原因?
养点鱼吃火锅
3方面原因1.一抗浓度太高或抗体不好2.封闭不完全,时间不够3.洗脱时间次数不够。
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问
自制溶液有效期如何确定?
天一湖医者
在实验阶段,配制一定浓度的溶液或者试剂作为受试液,分装后保存于适宜的环境中;按一定的时间间隔(日、周或月),取部分分装后标准溶液,以新配制标准溶液(X0)为标准对其进行测定,得到不同保存期的标准溶液浓度值(Xi)。计算X0与Xi相比较的En值,依据En值及Xi对应的保存期确定该标准溶液的有效期。可接受的En值(也称E比率)应在-1到+1之间,即En≤1(越接近零越好);2准确称取0.05000g三
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问
好久没有科研了,问个小白问题,wb抗体哪家比较好的?一抗二抗,准备实验的。
养点鱼吃火锅
一般还是选择进口品牌,写到文章里受认可度更高,也不是说国产抗体都不好,也有质优价廉的国产抗体。进口品牌比如abcam,CST,thermo等。进口的也有可能效果不好,需要试一下。
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问
请问转膜后封闭使用快速封闭液还是自行配置的5%脱脂奶粉效果好呢?
ZMY_foep
5%的脱脂奶粉好!也可以用牛血清蛋白
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问
蛋白条带总是粗粗的连在一起
balalaLy
就是蛋白量太大了,上样量减半吧
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问
IP后的蛋白洗脱液有60ul,要跑WB的话用多少合适?
balalaLy
比如我用2个100cm皿的细胞拉的蛋白可以按照10ul左右的上样量跑,大多数蛋白都可以跑出来
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问
求应用荧光分光光度计检测细胞内ph的方法
天一湖医者
近中性pH的检测BCECF及其膜渗透性AM酯是用于测量细胞内pH的最广泛使用的荧光pH指示剂。它的pKa约为6.98,非常适合测量各种细胞类型的胞质中的pH变化,以及监测近中性环境中的pH变化。BCECF在〜504 nm处有一个最大吸收,在〜440 nm处有一个等吸收点,在〜527 nm处有最大发射。尽管BCECF具有双重激发的比值特性,但一些特性使比值成像不理想。其等吸收点与最大激发之间距离较大
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问
jurkat 免疫抑制
天一湖医者
可以用jurkat细胞进行体外免疫抑制模型,刺激时间 6h,按时间梯度取样,以 Caspase 3 抗体检测
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问
96孔板铺板数量问题
伟点丽
细胞反复吹打对细胞活性也有一定的影响,单枪加平行孔之间会有偏差,可以用排枪加细胞悬液,保持平行孔的平行性
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问
WB实验时目的蛋白信号弱怎么办?
林夕娜娜
1.加大上样量2.使用高灵敏度的发光液。
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问
想请教一下:CCK-8需要避光的原因?
balalaLy
避免试剂中的有效成分降解,但也不需要很严格避光,只要不是灯光正对着照就行。
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问
买的抗体,说明书里图片显示目的条带只有一条,而自己做wb,却有多条带,什么原因呢?
balalaLy
有些时候是会这样,要调整一下抗体的浓度、稀释液、还有孵育时间。
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问
用BCA法测蛋白浓度的时候总会存在调平失败的状况,有的时候甚至不如不调,有什么小技巧让调平更稳一些吗
balalaLy
如果组间蛋白量差异比较大的前提下用BCA法定量是会有比较大的误差,所以尽量取细胞数差不多的,或者组织重量相近的。
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问
WB转膜用的膜有什么差别吗?实验室有两种,一个孔径大于20um,一个小于20um,但是有人说可以通用
秋秋欣欣
主要是看你的蛋白大小,如果你的蛋白很小最好用小孔径的,如果蛋白较大则需要用大孔径的膜
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