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问
请问细胞饥饿处理,通过酶联免疫检测不同时间的酪蛋白,若酪蛋白含量最低时是饥饿点吗
Eason老歌迷
是的。酪蛋白含量最低时是饥饿点。
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问
求助论文中转基因小鼠表述的意思
Eason老歌迷
转基因鼠是除了固有的基因组外,小鼠体内还有一个或以上外来转入基因,它能表达和体现转入基因的功能,实现特定目的。转基因是用DNA重组技术克隆的基因,通过一定的方式导入细胞或个体。通过转基因可对特定基因进行表达、修饰或删除。
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问
配完浓缩胶,本来还好好的,有时凝了一段时间后,孔和孔之间的胶突然出现泡泡,然后就塌了,尤其是最靠两边的孔慢慢的就塌了,为什么?
Eason老歌迷
首先浓缩胶它本来就会随着时间浓缩缩小。我感觉你这个可能还是有点漏,玻璃板密封性不佳?
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问
蛋白出现“笑脸”和“哭脸”条带的原因是为什么!
Eason老歌迷
出现笑脸哭脸的很大概率就是你制胶的时候没混匀。或者是电泳温度高了。
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问
关于WB电泳的若干疑问
Eason老歌迷
第一个问题,我用过预制胶和自己配的胶,我个人还是更喜欢用自己配的,感觉效果更好,当然前提是你一定要混匀。第二个问题,小蛋白在转膜时一定要注意控制时间。一般湿转半个小时即可。
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问
同一个细胞系提蛋白以后敷抗体显影显出背景很深,条带很杂……
Eason老歌迷
一个是你的封闭时间太短了。二个是你的抗体浓度过高。三个是你的有非特异性条带了,抗体特异性不高
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问
做wb,flag片段会被150kDa的融合蛋白遮蔽住,而检测不到吗?
Eason老歌迷
如果有,就要看Flag标签是不是正确表达了,如果表达不正确也会影响到检测的。
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问
用SD大鼠肾皮质组织提取出来的足细胞传代总是不成功是什么原因
Eason老歌迷
一个是你的培养基成分问题 二个是你的传代时间的选择。先网上查看ATCC对该细胞的建议,注意你使用的培养基种类、血清浓度及类型、传代细节等。有的细胞对营养物质要求高,需要胎牛血清,而当你使用小牛血清时,可能导致细胞状态不好。消化时间的掌握与经验有关系,难消化的细胞需要放在37℃培养箱里帮助消化。若附近有显微镜,就时不时镜检,看细胞变圆了就可以,再移液器吹打几下就能吹打下来;若没有显微镜,就看培养瓶底
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问
六孔板一个孔长满细胞大概有多少呀。
Eason老歌迷
可能是有2.5x10的6次方个
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问
胚胎裂解后怎么提取dna效果最好?
bamboopiggy
看你的实验目的啊,如果是做genotyping,可以直接加鼠尾裂解液就可以。如果想得到genomic DNA进行下一步的实验可以用试剂盒提取。
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问
大家相互分享一些能查阅图书的网站?
Eason老歌迷
我一般喜欢去孔夫子旧书网,买书
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问
《心血管病进展》杂志如何投稿
天一湖医者
根据您的描述,进入修改密码页面,那可能是浏览器问题,建议换一个浏览器。
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问
原代树突状细胞7天后收集悬浮细胞重新种板后还需要再加细胞因子嘛
Eason老歌迷
肯定需要的,你都重新种板了,你要不加细胞因子,肯定不行。
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问
请教下H9C2细胞培养相关问题
Eason老歌迷
你要是ct值这么大,肯定有问题。可能是模板量低或基因表达丰度低,建议增加模板量观察Ct值能否成相应倍数减少。或者qPCR整个反应条件不适宜或引物设计不当导致扩增效率低,建议通过标准曲线确认扩增效率。或者扩增产物过长,建议用三步法程序扩增或优化引物,扩增产物长度最好不超过300bp。或者体系中可能存在抑制剂影响酶的活性,建议梯度稀释模板或重新制备纯度更高的模板。你可以和你的同期讨论讨论。
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问
求应用荧光分光光度计检测细胞内ph的方法
天一湖医者
近中性pH的检测BCECF及其膜渗透性AM酯是用于测量细胞内pH的最广泛使用的荧光pH指示剂。它的pKa约为6.98,非常适合测量各种细胞类型的胞质中的pH变化,以及监测近中性环境中的pH变化。BCECF在〜504 nm处有一个最大吸收,在〜440 nm处有一个等吸收点,在〜527 nm处有最大发射。尽管BCECF具有双重激发的比值特性,但一些特性使比值成像不理想。其等吸收点与最大激发之间距离较大
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问
jurkat 免疫抑制
天一湖医者
可以用jurkat细胞进行体外免疫抑制模型,刺激时间 6h,按时间梯度取样,以 Caspase 3 抗体检测
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问
用bradford法定量蛋白的时候,用紫外分光光度计做线性的时候,相关系数总是做的不好,有没有相似经验的?
dxy_emzv2873
首先,实验习惯很重要,用枪的手法也是有标准的,可以去搜搜,保证稀释浓度准确。其次,样品用的什么溶剂,标准品也用什么溶剂溶解,保持一致。还有一点很重要,但是经常被忽视的:溶液里有些物质会对bradford法有影响。bradford法不受还原试剂的影响,样品中β–巯基乙醇的浓度可高达1M,DTT浓度的可高达5mM。但会收到略高浓度的去垢剂的影响,需要确保SDS低于0.01%,Triton X-100低
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问
各位师姐师兄细胞传代冻存时间是怎样的?
申东熙老伯
冻存时间?意思是冻多久吗?如果是-80的话,细胞冻个一年第二年就不太行了,放在液氮可以放很久。
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问
放线菌酮的浓度一般设置为多少? 最后拟合线性方程时,如果趋势更接近于曲线可以拟合为曲线方程吗?
guoyanli0000
一般设置0到200,可以拟合为曲线方程
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问
实验统计问题,我这样应该用那种统计方法
Eason老歌迷
试验中有两个个因素改变,我觉得用双因素试验方差分析即可。
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